貼壁細胞的消化:
1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
2、加入少量胰酶細胞消化液,略蓋過細胞即可,室溫放置 30 秒至 2 分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。
3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來此時吸除胰酶細胞消化液,加入含血清的*細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。
5、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及時吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
組織的消化:
不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。