1） 取準(zhǔn)備好的蛋白裂解液，和2*上樣緩沖液等體積混合，混勻后于100度煮10min，12000rpm離心5min，取適量體積上樣。
2） 電泳：使用配制好的電泳液，90V電泳20min，120V電泳至結(jié)束。
3） 轉(zhuǎn)膜：使用配制好的電轉(zhuǎn)液，100V恒壓電轉(zhuǎn)90min。
4） 封閉：用1*TBST配制5%的脫脂奶粉/BSA溶液，將膜置于5%的脫脂奶粉/BSA溶液中，室溫?fù)u床上孵育60min。
5） 孵育一抗，孵育條件為2-8度搖床上孵育過夜。
6） 洗滌，用1*TBST洗3次，每次10min。
7） 孵育二抗，孵育條件為室溫?fù)u床上孵育60min。
8） 洗滌，用1*TBST洗3次，每次10min。
9） 顯色和曝光，取顯色A液和B液等體積混合，將混合后的液體鋪滿整張膜，反應(yīng)2min，之后即可進(jìn)行曝光操作。

溶液配制
電泳液：取10*電泳液100ml，加入純化水，定容至1000ml。
電轉(zhuǎn)液：取10*電轉(zhuǎn)液100ml，加入800ml純化水和100ml無水甲醇。
1*TBST：取10*TBST溶液100ml，加入純化水，定容至1000ml。

2-8度保存,有效期6個月。