目錄:北京締一生物科技有限公司>>支原體檢測盒及標(biāo)準(zhǔn)品>> 支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（不含Taq酶）
| 供貨周期 | 一個月 | 規(guī)格 | 25次/盒 |
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| 貨號 | 11-1025 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 用于【細(xì)胞和生物制品】及其生產(chǎn)過程中【支原體】污染的檢測 |
支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（不含Taq酶）
10種常見支原體檢測限
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支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）（不含Taq酶）操作步驟
第1步：樣本處理
a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清
b. 生物藥或需遵循藥典的樣本
說明：①樣品基質(zhì)可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。
②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。
建議：樣本做DNA抽提處理，實現(xiàn)高靈敏度。
推薦：德國MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒，Venor® Gem Sample Preparation Kit。該DNA抽提試 劑盒已經(jīng)過廣泛驗證。
第2步：試劑制備
第3步：PCR體系建立
a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清
b. 生物藥或需遵循藥典的樣本
第4步：啟動PCR反應(yīng)
第5步：電泳結(jié)果分析
191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。
當(dāng)樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。
陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會*消失。
可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。
如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒，然后再檢測。
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