詳細(xì)介紹
Pan02-CAG-tTA-3E6現(xiàn)貨供應(yīng)操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
資源名稱 Pan02-CAG-tTA-3E6現(xiàn)貨供應(yīng)
種屬 tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類)
形態(tài) 多角
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)5%FBS+2.0ug/mlpuromycin
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
詳細(xì)說(shuō)明
描述 轉(zhuǎn)染pCAG-tTA質(zhì)粒,經(jīng)2.0ug/mlpuromycin篩選,為Tet-off穩(wěn)定調(diào)控細(xì)胞系,受強(qiáng)力霉素Dox調(diào)控倍數(shù)在20~50倍。細(xì)胞倍增時(shí)間為24小時(shí)。
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
使用權(quán)限 B類
冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
Pan02-CAG-tTA-3E6現(xiàn)貨供應(yīng)注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力,請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通交流。
6. 該細(xì)胞只能用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。100807-100 杜氏 PBS 緩沖液 ,10× 100mL
90707-50 動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒 50 次
D013-1 動(dòng)植物種屬鑒定 1 個(gè)樣
91204-50 動(dòng)植物膜蛋白微量制備試劑盒 50 次
131128F-100 動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 6 100 次
131128E-100 動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 5 100 次
131128D-100 動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 4 100 次
131128C-100 動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 3 100 次
131128B-100 動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 2 100 次
131128A-100 動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 1 100 次
130891-50 動(dòng)物線粒體總蛋白提取劑盒 50 次
111207B-15 動(dòng)物線粒體純化試劑盒 ( 精提 ) 15 次
111207A-15 動(dòng)物線粒體純化試劑盒 ( 粗提 ) 15 次
80807B-50 動(dòng)物細(xì)胞裂解液 B 50mL
80807A-50 動(dòng)物細(xì)胞裂解液 A 50mL
90613-25 動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒 25 次
90613-100 動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒 100 次
21-0050-5 動(dòng)物上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 5mL
3070-100 動(dòng)物 RNAout(TRIzol) 100mL
3070-250 動(dòng)物 RNAout(TRIzol) 250mL
3670-100 動(dòng)物 DNAout 100mL
3670-250 動(dòng)物 DNAout 250mL
131204-10 動(dòng)態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒 1.7mL×10 支
131203-48 動(dòng)態(tài)顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒 48 次
130809-1 定影粉 1袋
CAS9001-08-5 丁酰膽堿酯酶 500U
CAS156-54-7 丁酸鈉 1g
130427-50 丁基硫介質(zhì) 50mL
130426-50 丁基介質(zhì) 50mL
CAS26628-22-8 疊氮鈉 25g
130812-24 凋亡 DNAout 24 次