細(xì)胞特性:
1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱:小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào):YS-02X9538
細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) :細(xì)胞生長(zhǎng)良好,形態(tài)正常
儲(chǔ)存條件:2℃-8℃,避光儲(chǔ)存
運(yùn)輸條件:冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過,問題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長(zhǎng),-80度過夜,最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測(cè)定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。
TM/FITC 熒光素標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
OPN 骨橋蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1抗體 TGF-βR1/ALK 0.1ml
SKP1 英文名稱: S期激酶相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
alpha Elastin 英文名稱: α彈性蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-LAT (Tyr191) 磷酸化T細(xì)胞活化連接蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
OPN 骨橋蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Adiponectin 脂聯(lián)素(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
B7H4 B7-H4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Ack1(Tyr859/860) 磷酸化Ack1抗體 規(guī)格 0.1ml
MAP2a,b 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
UBF1 英文名稱: RNA聚合酶I抗體 0.1ml
CHST6 英文名稱: 碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶6抗體 0.1ml
B7H4 B7-H4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Secretin receptor 英文名稱: 分泌素受體抗體 0.2ml
ELMO2 英文名稱: 吞噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)蛋白2抗體 0.2ml
shank-1抗體 Shank1 0.1ml
TDP-43/TARDBP /FITC 熒光素標(biāo)記Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MDM2(Ser186) 磷酸化雙微體2癌基因抗體 規(guī)格 0.1ml
MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B164-[(叔丁氧羰氨基)甲基]吡啶-2-羧酸(>96.0%(HPLC)(T))正丁血液總膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
雙(鋅卟啉)(約5μmol/L的二氯溶液) 1-羥基-3,4,5-氧基山酮游離膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
雙(鋅卟啉)(約5μmol/L的二氯溶液)苦玄參苷 IA組織游離膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
五[4-(10,15,20-三苯卟吩-5-基)]二鋅(Ⅱ)(>97.0%(HPLC))醋酸乙酯血液游離膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
全氟三丁(>60.0%(GC))20(S)-原人參二結(jié)合(酯化)膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))20(S)-人參皂苷 Rh2組織結(jié)合(酯化)膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
2,4,6-三(五氟乙基)-1,3,5-三(>95.0%(GC))樟腦血液結(jié)合(酯化)膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
2,4,6-三(七氟基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))薏苡仁油總膽固酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測(cè)試劑盒