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          N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)重組蛋白

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          • N-?;拾贝减0匪饷?(ASAH1)重組蛋白

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          更新時(shí)間:2023-03-21 20:44:48瀏覽次數(shù):282

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
          主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 英文名稱 Recombinant N-Acylsphingosine Amidohydrolase 1 (AS
          種屬 Homo sapiens (Human,人) 規(guī)格 10μg50μg200μg1mg5mg
          品牌 研生    
          N-?;拾贝减0匪饷?(ASAH1)重組蛋白公司正在出售的產(chǎn)品:傳染性支氣管炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒Infectious Bronchitis Virus(IBV)RTPCR傳染性造血器官壞死病病毒PCR檢測(cè)試劑盒Infectious Hematopoietic Necrosis Virus(IHNV)RTPCR傳染性皮下和造血器官壞死病病毒PCR檢測(cè)試劑盒Infectious Hypoderm

          詳細(xì)介紹

          公司產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:

          產(chǎn)品名稱:N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)重組蛋白   

          物種:Homo sapiens (Human,人)

          英文名稱:Recombinant N-Acylsphingosine Amidohydrolase 1 (ASAH1)

          AC; ASAH; PHP; PHP32; Acid Ceramidase; Acylsphingosine deacylase; Putative 32 kDa heart protein

          酶與激酶

          物種:Homo sapiens (Human,人)

          來(lái)源:原核表達(dá)

          宿主E.coli

          內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

          亞細(xì)胞定位::溶酶體

          預(yù)測(cè)分子量:32.7kDa

          實(shí)際分子量:33kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)

          片段與標(biāo)簽:Thr144~Trp395 with N-terminal His Tag

          緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl, pH8.0, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.

          性狀:凍干粉

          純度:> 97%

          等電點(diǎn):7.5

          應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

          規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

          特點(diǎn):

          標(biāo)記:標(biāo)記反應(yīng)簡(jiǎn)單、溫和且很少抑制抗體活性,將與抗體共價(jià)結(jié)合是一種非常簡(jiǎn)便、直接的標(biāo)記方法。

          酶標(biāo)記:酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成,其應(yīng)用范圍非常廣泛,結(jié)果即時(shí)可見(jiàn)、敏感性高。

          熒光標(biāo)記:熒光基團(tuán)AbFluorTM是新型的熒光標(biāo)記物之一,產(chǎn)品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團(tuán)經(jīng)恰當(dāng)?shù)募す饪砂l(fā)光, 從而得知抗體的定位和待測(cè)抗原的分布情況,主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細(xì)胞水平定位的方法。

          相關(guān)產(chǎn)品:
          Recombinant Human IGHG1宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

          Recombinant Human NUMB宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

          Recombinant Human DNALI1宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

          Recombinant Human METTL4宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

          圖片6.png


          標(biāo)簽選擇:

          親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。

          不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

          真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

          a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)

          b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

          c.      無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

          d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

          e.      表達(dá)小試,條件優(yōu)化

          f.       表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)

          g.      大量表達(dá)

          h.      親和純化

          i.        檢測(cè)和鑒定

          原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

          a.      選擇表達(dá)載體

          b.      密碼子優(yōu)化

          c.      基因合成/亞克隆

          d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

          e.      蛋白表達(dá)小試分析

          f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

          g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白。

          h.      鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定

          GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

            誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。

          UCP-2產(chǎn)品名稱: 線粒體脫偶連蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Horse, Rabbit

          POLG產(chǎn)品名稱: DNA聚合meiγ/DNA pol γ抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig

          UBXD2產(chǎn)品名稱: UBX結(jié)構(gòu)域域蛋白D2抗體交叉反應(yīng): BAG2產(chǎn)品名稱: Bcl-2結(jié)合抑凋亡蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse

          Repetin產(chǎn)品名稱: 中間絲相關(guān)蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse

          LZTR2產(chǎn)品名稱: 亮氨suan拉鏈樣轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Sheep

          ZBED4產(chǎn)品名稱: 鋅指蛋白BED4抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Horse

          Tyrosine Hydroxylase產(chǎn)品名稱: 酪氨suan羥化mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow
          N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)重組蛋白β,β胡蘿卜su9',10'加氧mei(BCO2)ELISA試劑盒BCO2β,β胡蘿卜su9',10'加氧meielisa kitHuman BCO2 ELISA Kit

          α突觸核蛋白(α-SYN)ELISA試劑盒α-SYNα突觸核蛋白ELISA試劑盒Human α-Synuclein,α-SYN ELISA Kit

          α乳清蛋白(α-La)ELISA試劑盒α-Laα乳清蛋白elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human α Lactalbumin,α-La ELISA Kit

          α葡萄糖苷mei(α-Glu)ELISA試劑盒α-Gluα葡萄糖苷meielisa檢測(cè)試劑盒Human α-glucosidase,α-Glu ELISA Kit

          α-內(nèi)肽(α-EP)ELISA試劑盒α-EPα-內(nèi)肽elisa kitHuman α-Endomorphin,α-EP ELISA Kit
          操作步驟

          根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

          1、樣品前處理:

          a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

          b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。

          c)對(duì)于組織樣品: 把切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

          2、后處理:

          將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作

           


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