產(chǎn)品名稱(chēng):大鼠子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基
規(guī)格:100mL/125mL×4
貨號(hào):YS-02X10163
細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) :細(xì)胞生長(zhǎng)良好,形態(tài)正常
儲(chǔ)存條件:2℃-8℃,避光儲(chǔ)存
運(yùn)輸條件:冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞特性:
1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過(guò)低,10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過(guò)度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于細(xì)胞而言要求不是很?chē)?yán)格,我從10%-90%都用過(guò),問(wèn)題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長(zhǎng),-80度過(guò)夜,最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
F X ELISA Kit 大鼠凝血因子ⅩMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Wnt1 信號(hào)通路Wnt1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh GABPB2 核呼吸因子2抗體 規(guī)格 0.1ml
NAP-2/CXCL7(Human neutrophil activating protein-2) ELISA Kit 人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2 96T
phospho-NHE3(Ser552) 英文名稱(chēng): 磷酸化鈉離子/氫離子交換蛋白3抗體 0.1ml
ARPC2 英文名稱(chēng): 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型2抗體 0.2ml
Wnt1 信號(hào)通路Wnt1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
IL-18 小鼠白介素-18Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
phospho-ERK1(Thr202/Tyr204) 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MTHFR 亞甲基四氫葉酸還原酶MTHFR抗體 規(guī)格 0.1ml
C4BP(Human C4 binding protein) ELISA Kit 人C4結(jié)合蛋白 96T
SHROOM1 英文名稱(chēng): SHROOM1蛋白抗體 0.1ml
CD5 英文名稱(chēng): CD5抗體 0.1ml
phospho-ERK1(Thr202/Tyr204) 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Goat human IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgM 0.1ml
GPCR C5L2 英文名稱(chēng): G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體 0.2ml
血管緊張素原抗體 AT/AGT 0.1ml
NF-κBp50/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PRDX1 過(guò)氧化還原酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
VTG/FITC 熒光素標(biāo)記卵黃蛋白原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基電泳分析試劑盒(MMP1/3/7/12/13)甜茶
基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)膠原蛋白酶譜法(collagen-zymography)5次西梭米星
電泳分析試劑盒(MMP1/13)α-甘
基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)羧甲基轉(zhuǎn)鐵蛋白5次前列腺素A1
(CM transferrin -zymography電泳分析試劑盒(MMP7)芐氟噻嗪
細(xì)胞/組織蛋白(基質(zhì)金屬蛋白酶)樣品制備試劑盒20次炔諾酮
凍切片基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)原位明膠酶譜法(in situ zymography)熒光染色試劑盒20次阿司
細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)原位明膠酶譜法(in situ zymography)熒光染色試劑盒20次司坦唑醇
基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP1/2/3)逆相明膠酶譜法(reverse gelatin-zymography)電泳分析試劑盒(不含標(biāo)準(zhǔn)樣)5次泛酸
細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)素明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20次鹽酸金
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)生素明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20次鹽酸
體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)生物明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20磷酸吡哆醛丁咯地爾
細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)生明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20次人麻疹病IgM(MV IgM)Elisa測(cè)定試劑盒
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)生明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20次人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)Elisa測(cè)定試劑盒
體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)素明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20次知母探針?lè)≒CR鑒定試劑盒
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱(chēng)量試劑:根據(jù)不同的菌類(lèi)和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱(chēng)量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測(cè)定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過(guò)濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。
(四)分裝:將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。