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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Recombinant Granzyme M (GZMM) |
| 種屬 | Homo sapiens (Human，人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
| 品牌 | 研生 |
詳細(xì)介紹
蛋白表達(dá)及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
顆粒酶M(GZMM)重組蛋白 | Recombinant Granzyme M (GZMM) | Homo sapiens (Human，人) |
商品介紹：
GZM-M; LMET1; MET1; Hu-Met-1; Met-ase; Lymphocyte Met Ase 1; Met-1 serine protease; Natural killer cell granular protease 酶與激酶 物種：Homo sapiens (Human，人) 來源：原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定) 亞細(xì)胞定位：：分泌, 細(xì)胞質(zhì) 預(yù)測(cè)分子量：25.6kDa 實(shí)際分子量：26kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書) 片段與標(biāo)簽：Ile26~Ala257 with N-terminal His Tag 緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300） 性狀：凍干粉 純度：> 90% 等電點(diǎn)：10.3 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
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操作步驟：
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL～1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)：
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。
2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
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