細(xì)胞特性:
1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱:乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-157
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào):YS-02X9886
細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) :細(xì)胞生長良好,形態(tài)正常
儲(chǔ)存條件:2℃-8℃,避光儲(chǔ)存
運(yùn)輸條件:冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對數(shù)生長期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過,問題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。
VSIG4 /FITC 熒光素標(biāo)記T細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CK19 細(xì)胞角蛋白19多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被) CEA 0.1ml
Sprouty1 英文名稱: 軟脂酰化磷蛋白Sprouty1抗體 0.1ml
eRF1 英文名稱: 真核肽鏈釋放因子1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Gab1 (Tyr659) 磷酸化接頭蛋白Gab 1抗體 規(guī)格 0.1ml
CK19 細(xì)胞角蛋白19多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
GCP-2 human 人中性粒細(xì)胞趨化蛋白-2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
cofilin 絲切蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Notch 2 跨膜受體蛋白Notch-2抗體 規(guī)格 0.1ml
Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2 96T
TdT 英文名稱: 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml
C6orf168 英文名稱: 6號(hào)染色體開放閱讀框168抗體 0.2ml
cofilin 絲切蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Mouse IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
FOPNL 英文名稱: 胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白FOPNL抗體 0.2ml
凝血酶原酶抗體/纖維介素蛋白/前凝血素抗體 fgl2 0.1ml
phospho-CaMK2a(pTyr231) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-STAT6(Thr645) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Guinea IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗豚鼠IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml
乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-157動(dòng)物組織氧化應(yīng)活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次小鼠組織蛋白去乙?;福℉D)ELISA試劑盒,
植物氧化應(yīng)活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法50次小鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒,
定量檢測試劑盒大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒,
純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒20次大鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒,
純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)初級(jí)熒光測定試劑盒20次大鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒,
膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒20次豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒,
呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒20次鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒,
膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)初級(jí)熒光測定試劑盒20次猴γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒,
呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)初級(jí)熒光測定試劑盒20次兔子層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒,
細(xì)胞總抗氧化能力(TAC)化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次心浸液瓊脂
組織總抗氧化能力(TAC)化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次L-酪乙酯鹽酸鹽
食物總抗氧化能力(TAC)化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次3-氨基丁酸
體液總抗氧化能力(TAC)化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次GST瓊脂糖凝膠4FF
細(xì)胞總抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量檢測試劑盒50次辛基瓊脂糖凝膠4FF
組織總抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量檢測試劑盒50次人周期素依賴性酶1(CDK-1)ELISA試劑盒, CDK-1 ELISA