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          技術(shù)文章

          避免污染的原代細(xì)胞培養(yǎng)方法

          閱讀:589          發(fā)布時(shí)間:2018-6-12

           培養(yǎng)原代細(xì)胞常規(guī)方法需用二氧化碳溫箱,且為保持箱內(nèi)二氧化碳?xì)?%~10%的濃度,需持續(xù)輸入二氧化碳?xì)怏w。為此,箱內(nèi)的培養(yǎng)瓶蓋不能擰緊以便二氧化碳?xì)怏w自由進(jìn)出。

              *步,配制1L培養(yǎng)液。培養(yǎng)基中含有酚紅指示劑,偏堿時(shí)液體為深紅或紫色,偏酸時(shí)則呈黃色。取配1L培養(yǎng)液的粉劑培養(yǎng)基,加入750ml三蒸水或去離子水,搖勻(一般培養(yǎng)液呈橘紅色);再加入碳酸氫鈉1~1.1g,至*溶解(呈深紅色);zui后再加三蒸水或去離子水至1L止。

              第二步,插吸管于配好的培養(yǎng)液內(nèi),通入二氧化碳?xì)怏w。隨著二氧化碳?xì)獾娜谌?,液體逐漸變成黃色。用一次性0.22 m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過濾除菌。在此過程中,由于部分二氧化碳?xì)怏w溢出,液體漸成橘黃色。此時(shí)迅速將其分裝到4個(gè)250ml的瓶內(nèi),一定塞嚴(yán)或擰緊瓶。在無菌情況下取樣本數(shù)毫升,37。c無菌培養(yǎng)72h,確定該批培養(yǎng)液無污染后方可使用。常使用的培養(yǎng)液存放于4℃冰箱內(nèi),其它暫時(shí)不用的可放入一20。c冰箱內(nèi)保存。

              第三步,根據(jù)不同細(xì)胞系的需求添加不同量血清和抗生素。將配好的培養(yǎng)液吸入小培養(yǎng)瓶內(nèi),再將適量細(xì)胞吸入,塞嚴(yán)或擰緊瓶蓋,置37。c普通隔水式恒溫箱內(nèi)即可。操作過程中因有少量二氧化碳?xì)怏w溢出,液體呈橘紅色,酸堿度(pH) 約為7.0~7.2。如果原代細(xì)胞較少或者生長較慢,液體的pH值似宜偏酸些為好。

              我們的產(chǎn)品原料為進(jìn)口原裝:無菌包裝,不需要做任何除菌的處理,直接使用。

          250 用于副溶血性弧菌的增菌培養(yǎng) 副溶血性弧菌增菌液

          250 Sodium Chloride Violet purple Enrichment Broth 用于副溶血性弧菌的選擇性增菌培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn)) 氯化鈉結(jié)晶紫增菌液    

          250 Halophilic Bacteria Selective Agar 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn)) 嗜鹽菌選擇性瓊脂  

          250 Sodium Chloride Sucrose Agar 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn)) 氯化鈉蔗糖瓊脂    

          250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng) 副溶血性弧菌瓊脂

          250 NaCl Triple Sugar Iron Agar 用于副溶血性弧菌的生化反應(yīng)篩選(SN標(biāo)準(zhǔn)) 氯化鈉三糖鐵     

          250 Sodium Chloride Blood Agar Base 用于副溶血性弧菌的溶血試驗(yàn) 氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ)   

          250克 Wagstsuma Agar Base 用于副溶血性弧菌的溶血試驗(yàn) 我妻氏血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)

          250 60%/L NaCl Peptone Water 用于副溶血性弧菌的前增菌培養(yǎng) 60%/L氯化鈉蛋白胨肉湯    
          原代細(xì)胞

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