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          技術(shù)文章

          細胞株的形態(tài)學觀察和檢定

          閱讀:399          發(fā)布時間:2018-5-22

          細胞株的形態(tài)學觀察及鑒定:細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)及生長特征,并作相差攝影,同時進行常規(guī)HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法,在6孔培養(yǎng)板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液,待細胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min,PBS沖洗3次,每次2min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多抗工作液,放入濕盒內(nèi)4℃過夜,同時另一蓋玻片不加一抗作陰性對照。次日,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加辣根酶標記的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS沖洗3次,每次2min,用DAB底物混合工作液顯色,顯微鏡下觀察,待出現(xiàn)特異性染色后,終止顯色,進行復染,脫水,透明,封片,相差顯微鏡下觀察攝影。

          細胞株的形態(tài)學觀察:相差倒置顯微鏡下觀察,人臍靜脈內(nèi)皮細胞貼壁單層生長,呈短梭狀或鋪路石樣鑲嵌排列,細胞為扁平多角形,邊界清楚,胞漿豐富。胞核清晰可見,為圓形或橢圓形。原代培養(yǎng)細胞,于接種后2h開始貼壁生長,傳代細胞約半小時后即開始貼壁生長。原代細胞一周左右可長滿,傳代細胞生長旺盛,有時可見多核細胞。

          Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定:細胞株Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色可見細胞呈圓形、梭形或多邊形,胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒,核周密集,而對照組內(nèi)未見著色。證實培養(yǎng)的細胞為內(nèi)皮細胞。

           磷酸化谷氨酸受體1IgG 人抗甲型肝炎病毒IgG(anti-HAV) 

           磷酸化谷氨酸受體1IgG 人抗肌內(nèi)膜IgA(EMA IgA)

           磷酸化谷氨酸受體2AIgG 人抗肌聯(lián)蛋白(TTN)

           磷酸化谷氨酸受體2AIgG 人抗肌動蛋白(AAA)

           磷酸化谷氨酸受體2BIgG 人抗環(huán)胍氨酸肽(CCP)

           磷酸化谷氨酸受體2BIgG 人抗呼吸道合胞病毒(RSV)

           磷酸化過氧化酶活化增生受體γIgG 人抗紅(RBC) 

           磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶IgG 人抗丁型肝炎病毒(anti-HDV) 
          細胞株

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