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植物細胞質壁分離技術分析
閱讀:1113 發(fā)布時間:2017-2-23(1)原代細胞質壁分離法:成長的植物細胞一般具有中央液泡,在中央液泡和細胞壁之間為細胞質的薄層及其內外膜——液泡膜和質膜。液泡中的胞液具有一定的溶質勢(或稱滲透勢),而活的原生質特別是液泡膜和質膜則具有半透性。所以,當細胞與外界溶液接觸時,便與外液構成滲透系統(tǒng),并可能發(fā)生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質勢,則水分外滲的結果可使原生質隨著液泡一起收縮而脫離細胞壁,發(fā)生質壁分離,質壁分離的細胞與水或水勢較高的溶液接觸時,可重新吸水而是質壁分離復原。
原代細胞實驗步驟
1、 試劑的配置:
① 臺盼藍:4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。
② 中性紅:先配成1%中性紅水溶液(1克中性紅溶于100毫升蒸餾水中)。取這種溶液1毫升,用0.6%生理鹽水(或蒸餾水)稀釋到50毫升,即成0.02%中性紅水溶液,貯存在棕色瓶里,放在黑暗處。
③ 美藍:取0.5克美藍,溶于30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氫氧化鉀溶液,保存在棕色瓶內。此溶液能染細胞核,還用來染細菌、血和神經組織等。
④ 甲基藍:取1克甲基藍,溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸餾水,即成1%甲基藍染液。
2、 染色操作步驟:略
3、 細胞活力測定:染色過的細胞材料,放在顯微鏡下觀察。凡未染或染色及淺的細胞是有活力的,而染色深的細胞是無活力的死細胞。
4、 按公式計算出細胞活力。 細胞活力(%)=未染色的細胞數/觀察的細胞總數 X 100%
原代細胞注意事項
1. 臺盼藍對人體有毒
2. 對細胞進行染色時,時間不宜過長。否則,部分活細胞也會著色,會干擾計數。