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雜交瘤細(xì)胞技術(shù)分析
閱讀:397 發(fā)布時間:2017-2-7雜交瘤細(xì)胞技術(shù)分析
克隆化的細(xì)胞可以在體外進(jìn)行大量培養(yǎng),收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限,其不能超過特定的細(xì)胞濃度,且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來的腫瘤細(xì)胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠(無胸腺的裸鼠),雜交瘤細(xì)胞就開始無限地繁殖,直至宿主死亡。產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹水和血清中含有大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體,這種抗體的效價往往高于培養(yǎng)細(xì)胞上清液的100~1000倍。
利用免疫抑制劑,如降植烷、液體石蠟、抗淋巴細(xì)胞血清等,可以加速和促進(jìn)腫瘤的生長。
1.材料 (1)經(jīng)高壓滅菌的降植烷。
(2)Balb/c鼠:5~8周齡。
(3)雜交腫瘤細(xì)胞:取對數(shù)生長期的細(xì)胞。
(4)RPMI—1640培養(yǎng)液
(5)新生牛血清
2.操作方法
(1)于小鼠腹腔注射0.5ml降植烷,注射后1~9周內(nèi)種植細(xì)胞。
(2)收取對數(shù)生長期的雜交瘤細(xì)胞,用5%FCS—1640液洗滌一次,1000r/min離心10min。
(3)取樣,用臺盼蘭染色,計活細(xì)胞數(shù),重新用5%FCS—1640液配成1.0×107細(xì)胞/ml的懸液。
(4)給注射了降植烷的小白鼠接種雜交腫瘤細(xì)胞,每只腹腔注射1ml(含1.0×107個細(xì)胞/ml)。
(5)接種后10天左右時間腫瘤體積zui大,此時可由腹腔抽取腹水,每隔1~3天取1次,可取10次。血清可由腋下動脈或心臟采血后分離。