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細胞系活性檢測方法之乳酸脫氫酶(LDH)釋放法
閱讀:14806 發(fā)布時間:2017-1-5細胞系活性檢測方法之乳酸脫氫酶(LDH)釋放法
LDH是活細胞漿內酶,當細胞損傷,細胞膜通透性變化時,會將LDH釋放到培養(yǎng)液中。因此培養(yǎng)液中該酶的活性與被裂解的細胞系數(shù)量成正比。由LDH催化的酶促反應在催化乳酸生成丙酮酸的過程中使氧化型輔酶I(NAD)變成還原型輔酶I(NADH+H),后者再通過遞氫體一吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化四氯唑(INT),INT接受氫離子被還原成紫紅色的化合物,酶標儀檢測其OD值。與結晶紫染色法和MTT比色法進行靈敏度、重復性和相關性比較,該法簡便,靈敏度高,敏感性、客觀性、試劑成本及測定速度等都要優(yōu)于結晶紫染色法和MTT比色法。
LDH法常用于NK細胞系、CTL細胞活性檢測,從而評價機體免疫功能;與免疫常用方法Cr釋放法相比,操作省時和不存在同位素污染等優(yōu)點,引起人們很大興趣。但此法影響因素較多,諸如培養(yǎng)基、pH值、溫度及加底物顯色時間和終止劑等,實際操作不易掌握。
類似以上通過檢測細胞內酶活性的變化從而間接判斷細胞活性的方法還有很多,如酸性磷酸酶法(Acid phosphatasi assay,APA),利用酯酶的熒光素雙醋酸酯(FDA)法等。