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資源名稱:缺陷短波單胞菌培養(yǎng)
種屬:Brevundimonas diminuta
安全等級 1
模式菌株 no
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉汁瓊脂:膏 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4?H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。
生長條件 37℃,好氧
缺陷短波單胞菌培養(yǎng)檢測方法:
1.將病人標(biāo)本和/或液狀對照品放至室溫(15-30℃),輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。
2.將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標(biāo)本中,*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水,將拭子靠在收集容器的邊上,排去多余的液體。
3.檢測卡內(nèi)部的右手邊有兩個(gè)孔,將拭子插入底部的孔中(拭子孔),穩(wěn)步向前推,使整個(gè)拭子頭在上部的孔中可見,不要取出拭子。
4.垂直持放A試劑瓶,高出檢測卡上方1/2到1英寸,慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。
5.立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯,封閉檢測卡,過15分鐘在窗口判讀結(jié)果。15分鐘后讀取的結(jié)果可能不準(zhǔn)確。然而,有些陽性病人不到15分鐘就出現(xiàn)可見樣品線。
缺陷短波單胞菌培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1. 取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。
2. 凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO)對細(xì)胞不是*無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作 較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。
3. 離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。
4. 離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除 DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大, 死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液 體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無有異常。
5. 細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15m培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。
6. 復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。
7. 加培養(yǎng)基的量放入問題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響 細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個(gè)說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是 10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
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小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體I(TNFsRI) 規(guī)格: 96T/48T Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor I ELISA KIT 原裝、分裝
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小鼠抵御素(Rsistin) 規(guī)格: 96T/48T Mouse Rsistin(m)ELISA kit 原裝、分裝
小鼠調(diào)節(jié)活化蛋白(Rantes) 規(guī)格: 96T/48T Mouse Rantes ELISA kit 原裝、分裝
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[25-OH-D3elisa試劑盒]規(guī)格型號:96T/48T關(guān)鍵詞:[25-OH-D3試劑盒ELISA] 用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人骨髓抑制1(MPIF-1/CCL23)的含量。保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
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