詳細介紹
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
顆粒酶A(GZMA)活性蛋白人 | Homo sapiens (Human,人) | GOY-01D3081 |
英文名稱:Active Granzyme A (GZMA)
CTLA3; HFSP; HF; H factor; Granzyme 1; Fragmentin-1; Hanukkah factor; Cytotoxic T-Lymphocyte-Associated Serine Esterase 3; CTL tryptase; Cytotoxic T-lymphocyte proteinase 1
型號:GOY-01D3081
酶與激酶
感染免疫
免疫分子
物種:Homo sapiens (Human,人)
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 97%
等電點:9.2
應(yīng)用:Cellculture;ActivityAssays.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
以下是相關(guān)產(chǎn)品:
中文名稱100:胃原A(PGA)重組蛋白產(chǎn)品名稱:Recombinant Pepsinogen A (PGA)
Recombinant Corin (CRN)產(chǎn)品名稱:Corin蛋白(CRN)重組蛋白物種:Human,人ATC2; CRN; Lrp4; TMPRSS10; Atrial Natriuretic Peptide-Converting Enzyme, Serine Protease; Heart-specific serine proteinase ATC2; Pro-ANP-converting enzyme
Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 1 (PDK1)產(chǎn)品名稱:丙酮酸脫氫酶激酶同工酶1(PDK1)重組蛋白物種:Rat,大鼠[Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小檗堿規(guī)格:1g/支;98%
小白菊內(nèi)酯;Parthenolide 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
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50T 人白血病μ-BCR-ABL融合基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
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馬去素(NE)免疫試劑盒進口、分裝
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豬色素上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒
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人腺病毒IgG(ADV-IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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