蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：顆粒酶M(GZMM)重組蛋白小鼠

英文名稱：Recombinant Granzyme M (GZMM)

GZM-M; LMET1; MET1; Hu-Met-1; Met-ase; Lymphocyte Met Ase 1; Met-1 serine protease; Natural killer cell granular protease

型號：GOY-01D194

酶與激酶

物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：分泌

預(yù)測分子量：55.0kDa

實際分子量：55kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Arg31~Arg257 with N-terminal His and GST Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點：8.9

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Beta Polypeptide (PIK3Cb)  產(chǎn)品名稱：磷酸肌醇-3-激酶催化亞基β肽(PIK3Cb)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Delta Polypeptide (PIK3Cd)  產(chǎn)品名稱：磷酸肌醇-3-激酶催化亞基δ肽(PIK3Cd)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant L-Threonine Dehydrogenase (TDH)  產(chǎn)品名稱：L-脫氫酶(TDH)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 22 (ADAM22)  產(chǎn)品名稱：解整合素金屬22(ADAM22)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 28 (ADAM28)  產(chǎn)品名稱：解整合素金屬28(ADAM28)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 4 (ADAMTS4)  產(chǎn)品名稱：血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶4(ADAMTS4)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

磷酸化周期素依賴性激酶7抗體 phospho-CDK7 (Thr170)

2號染色體開放閱讀框60抗體 C2orf60

磷酸化周期素依賴性激酶9抗體 Phospho-CDK9 (Thr29)

磷酸化細(xì)胞周期檢測點激酶1抗體 phospho-CHEK1 (Ser280)

磷酸化細(xì)胞周期檢測點激酶1抗體 phospho-CHEK1(Ser317)

磷酸化抑癌基因p16抗體 phospho-CDKN2A (Ser140)

磷酸化抑癌基因p16抗體 phospho-CDKN2A (Ser152)

磷酸化抑癌基因p16抗體 phospho-CDKN2A (Ser8)

磷酸化粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體β抗體 phospho-CSF2RB (Tyr766)

磷酸化N-鈣粘附分子抗體 phospho-CDH2 (Tyr820)

磷酸化CREB-1抗體 phospho-CREB-1(Ser129)

磷酸化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體 phospho-CDC27 (Thr244)

顆粒酶M(GZMM)重組蛋白小鼠嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus海棗曲霉 Bacillus licheniformis

大鼠支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii

NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞)大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

 細(xì)胞名稱大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞（低分化）

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人星形膠質(zhì)細(xì)胞

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens

暗產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces phaeochromogenes

膨端青霉 Penicillium inflatum苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

MDA-MB-468(人腺細(xì)胞)無色透鏈霉菌 Streptomyces hyalinum

大鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基

植物桿菌 Lactobacillus plantarumRKO-AS45-1(人結(jié)腸轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)

泡盛曲霉 Aspergillus awamori泡盛曲霉 Aspergillus awamori

淺玫瑰鏈霉菌 Streptomyces roseolus