詳細介紹
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱:乙醛脫氫酶(ALDH)紫外分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法: 紫外分光光度法
貨號:GOY-01S6349
分類:輔酶Ⅰ系列
商品介紹:
乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化,所以在細胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注;同時,乙醛脫氫酶在分子生物學以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應用。
測定原理
在輔酶Ⅰ存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到乙醛脫氫酶的活性。
自備實驗用品及儀器
天平、離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
CREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 鋅指蛋白ZBTB6抗體
軟骨相關(guān)蛋白CRTAP抗體 鋅指蛋白ZBTB5抗體
1號染色體開放閱讀框100抗體 鋅指蛋白ZBTB3抗體
1號染色體開放閱讀框104抗體 鋅指蛋白ZBTB38抗體
1號染色體開放閱讀框112抗體 鋅指蛋白ZBTB34抗體
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乙醛脫氫酶(ALDH)紫外分光光度法測試盒柱式凝固血液 DNAout50 次 一站式 GST 標記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
FTA 血片 DNAout50 次 一站式 GST 標記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
柱式凍存血液 DNAout50 次 一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次
柱式凍存血液 DNAout250 次 一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝30 次
血液線粒體和核 DNA 雙提試劑盒 25 次 一站式 CTAB-PAGE 電泳套裝30 次
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。