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產(chǎn)品名稱:胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測試方法: 微量法
貨號(hào):GOY-01S6356
分類:輔酶Ⅱ系列
商品介紹:
ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。
測定原理:
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
腺苷單0酸活化蛋白激酶β2抗體 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體
細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPγ抗體
0酸化蛋白激酶B2抗體 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體
0酸化鐵蛋白Fe65抗體 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 抗體
發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白BACH2抗體
大鼠不對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)elisa分析檢測試劑盒
大鼠不對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)elisa檢測試劑盒
大鼠層連蛋白(Laminin)elisa檢測試劑盒
大鼠層連蛋白/板層素(LN)elisa分析檢測試劑盒
大鼠層連蛋白/板層素(LN)elisa檢測試劑盒
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)微量法測試盒柱式醬油 DNAout10 次 液相內(nèi)毒素清除劑500 次
溶壁酶干粉1g 液相內(nèi)毒素清除劑100 次
蝸牛酶干粉5g 液相 RNase 清除劑1.5mL
消解酶 ( 溶細(xì)胞酶 ) 干粉100mg 液體蛋白純化回收試劑盒50 次
真菌 DNAout50 次 液體 RNAout50 次
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。