商品介紹:
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測(cè)MDA的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。
測(cè)定原理:
MDA與硫代酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在532nm有最大吸收峰,進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時(shí)測(cè)定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計(jì)算MDA的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品名稱:丙二醛(MDA)微量法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測(cè)試方法: 微量法
貨號(hào):GOY-01S6414
分類:氧化與抗氧化系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!
Tricine-SDS-PAGE 陽極電泳液 ( 干粉 )10L JM110 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
Tricine-SDS-PAGE 陽極電泳液 ( 干粉 )50L JM109 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液 ( 干粉 )10L JC-11mg
Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液 ( 干粉 )50L JC-105mg
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 高 pH)30 次 IPTG 溶液,200mg/mL1.5mL
GST 固定試劑盒1套 MG-132(Proteasome 抑制劑 )1mg
甘肽 S 轉(zhuǎn)移酶1mg Metformin(LKB1-AMPK 激活劑 )1g
核酸清除劑1.5mL MEQ,(6- 甲氧 -N- )100mg
非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次 m7G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD
微量蛋白沉淀試劑盒50 次 m7G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD
大鼠V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠V-Jun肉瘤病毒癌基因同源物(JUN)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠V-Myc骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)elisa檢測(cè)試劑盒
丙二醛(MDA)微量法測(cè)試盒血清白蛋白清除劑15 次 M15 感受態(tài)細(xì)胞0.1 mL×10
免疫蛋白清除劑20 次 M13mp18DNA10μg
SDS-PAGE 預(yù)制膠12 塊 M13mp18DNA10μg
一站式 SDS-PAGE 電泳套裝30 次 M13 噬菌體單鏈基因組 DNAout50 次
SDS-PAGE 濃縮膠配膠液500mL Lyso-Tracker Red( 溶酶體紅色熒光探針 )50μL