詳細(xì)介紹
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產(chǎn)品名稱:植物全磷可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100T
測(cè)試方法: 可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào):GOY-01S6797
分類:離子系列
商品介紹:
磷的存在形態(tài)包括無(wú)機(jī)磷與有機(jī)磷。無(wú)機(jī)磷主要指磷酸根,參與生物體內(nèi)多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等。通過(guò)測(cè)定總磷與無(wú)機(jī)磷含量即可了解作物對(duì)磷的利用率,進(jìn)而為合理施肥提供依據(jù)。
測(cè)定原理:
植株樣品用硫酸-過(guò)氧化氫消化,使各種形態(tài)磷轉(zhuǎn)變成正磷酸鹽,正磷酸鹽與鉬銻抗顯色劑反應(yīng),磷鉬藍(lán),藍(lán)色溶液的吸光度與含磷量呈正比例關(guān)系,用酶標(biāo)儀測(cè)定。
自備儀器和用品:
石墨消解儀、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水和濃硫酸。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
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大鼠花生四烯酸12-脂氧合酶,白細(xì)胞型(Alox12l/Alox12/Alox15)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
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植物全磷可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒Tricine-SDS-PAGE 陽(yáng)極電泳液 ( 干粉 )10L JM110 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
Tricine-SDS-PAGE 陽(yáng)極電泳液 ( 干粉 )50L JM109 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液 ( 干粉 )10L JC-11mg
Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液 ( 干粉 )50L JC-105mg
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 高 pH)30 次 IPTG 溶液,200mg/mL1.5mL
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。