詳細(xì)介紹
商品介紹:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。
測定原理:
GP催化糖原和無機磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時測定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)時測定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 測試方法 | 貨號 |
糖原磷酸化酶b(GPb)微量法測試盒 | 100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6977 |
劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
測定操作表:
酶活性計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位(U)。
DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 18×A460÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 18×A460÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T= 18×A460÷細(xì)胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460
ε:氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù):7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,30min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位(U)。
DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 36×A460÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 36×A460÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
96 孔板病毒 RNAout( 離心法 )1次 柱式酵母質(zhì)粒 DNAout50 次
96 孔板病毒 RNAout( 離心法 )5次 柱式酵母 DNAout50 次
96 孔板病毒 RNAout( 真空法 )1次 柱式醬油 DNAout10 次
沉淀法 miRNA 分離試劑盒50 次 柱式海洋動物 DNAout50 次
一站式柱式 miRNAout50 次 柱式骨骼 DNAout50 次
柱式凝固血液 DNAout50 次 一站式 GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
FTA 血片 DNAout50 次 一站式 GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
柱式凍存血液 DNAout50 次 一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次
柱式凍存血液 DNAout250 次 一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝30 次
血液線粒體和核 DNA 雙提試劑盒 25 次 一站式 CTAB-PAGE 電泳套裝30 次
BCIP/NBT顯色試劑盒
BCIP/NBT顯色試劑盒100ml
BCIP/NBT顯色試劑盒50ml
BL21DE3感受態(tài)細(xì)胞 20 x 100μl
b-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NAG測試盒 50管/24樣 比色法
糖原磷酸化酶b(GPb)微量法測試盒AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Wortmannin(PI3K 抑制劑 )0.5mg
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL WGA 糖蛋白分離試劑盒10 次
GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Vinblastine( 長春新堿 )100μL
LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL UTP 溶液,2.5mM2mL
AH109 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL UTP 溶液,100mM0.25mL
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