雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法     英文名稱(chēng)：Chicken Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit       檢測(cè)方法：elisa酶聯(lián)免疫分析法ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法。其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便。凡購(gòu)買(mǎi)本公司試劑盒非人為質(zhì)量問(wèn)題，收貨后十五個(gè)工作日內(nèi)包退換。 
英文名稱(chēng)： Chicken Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit
規(guī)格：96T/48T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等
性狀：盒裝液體
人白介素2受體（IL-2R)Elisa測(cè)定試劑盒用途：科研與實(shí)驗(yàn)試劑，不得用于臨床診斷。
標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚(yú)等。
雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 緩沖液使用：加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻，靜置1小時(shí)備用（如果標(biāo)本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。
雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法樣品收集、處理及保存
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104 -106 /ml 左右，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或 者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱(chēng)取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo) 本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解 凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組（6 個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。 注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul 的待測(cè)樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙*拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。 9. 讀板：在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。 
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3. 孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商， 如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法安全性
1． 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

兔抗羊IgG（免疫血清）   0.5ml   支

SABC(小鼠/兔IgG)-POD kit    100-200T    盒

50×TAE 緩沖液  500ml   瓶

通用引物 ITS5 (10uM)    250ul   支

MRS肉湯 250g    瓶

L-Cysteine hydrochloride anhydrous L-鹽酸半胱氨酸   25g 瓶

[I125] Human HDL I125放射性標(biāo)記高密度脂蛋白 300uCi  瓶

SOD 超氧化物岐化酶(來(lái)源牛紅細(xì)胞)    15KU    瓶

Linezolid 利奈唑酮  5g  瓶

Evans Blue 埃文斯藍(lán) 1g  瓶

Hoechst 33342染色液(即用型) 10ml    瓶

Solar Fluor 555（效果同Alexa Fluor 555）    5 mg    支

兩性電解質(zhì)pH3-10 40%    12ml    瓶

Pig Bile salt 豬膽鹽    25g 瓶

HPD600大孔吸附樹(shù)脂  500g    瓶

8-苯胺-1-萘磺酸 8-Anili-naphthalenesulfonic acid-ANSA   25g 瓶

Syringaldehyde 丁香醛   5g  瓶

4-Aminobenzoic acid 對(duì)氨基苯甲酸    25g 瓶

PPO 2,5-二苯基噁唑  5g  瓶

稱(chēng)量紙 75mm×75mm   100張-包    包

(直徑)13mm水系濾器  0.45um  個(gè)

5ml注射器 國(guó)產(chǎn)  1支 袋

L-Phenylalanine L-苯丙氨酸  63-91-2 200mg

Levodopa 左旋多巴   59-92-7 20mg

Epinephrine hydrochloride 鹽酸腎上腺素  329-63-5    100mg

Methyl eugenol 甲基丁香酚   93-15-2 20mg

黑木耳多糖      20mg 6-（（2-（（4-（2，4-Dichlorophenyl）-5-（4-methyl-1H-imidazol-2-yl）pyrimidin-2-yl）amino）ethyl）amino）nicotinonitrile； CT99021 EZSolution CHIR99021， Sterile-Filtered

AdoMet SAM disulfate p-toluenesulfonate； SAMe  S-Adenosyl-L-methionine disulfate tosylate

Z-Val-Phe-CHO； Carbobenzoxy-valinyl-phenylalaninal； Calpain Inhibitor III MDL 28170

L-Threoascorbic acid， Antiscorbutic factor， Vitamin C L-Ascorbic acid

5-[2，4-Bis[（3S）-3-methyl-4-morpholinyl]pyrido[2，3-d]pyrimidin-7-yl]-2-methoxybenzenemethanol    AZD8055

（2Z） -2-Cyano-N-（2，5-dibromophenyl）-3-hydroxy-2-butenamide LFM-A13

D-（    Chloramphenicol

3，5-Bis[（4-methylphenyl）methylene]-4-piperidone hydrochloride    DUB Inhibitor， NSC-632839

雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法Ethyl （3-methyl-6-（4-methyl-3-（methylsulfonamido）phenyl）-[1，2，4]triazolo[4，3-b]pyridazin-8-yl）carbamate    Bromosporine

β-Nicotinamide adenine dinucleotide， reduced form， （Reduced Coenzyme-I） disodium salt； β-DPNH， β-NADH， DPNH    NADH， disodium salt

T20 （PBS） Blocking Buffer EZBlock T20 （PBS） Blocking Buffer