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詳細(xì)介紹
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
MMLV cDNA Synthesis Kit | 100次 | GOY-F10306 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本試劑盒是專為兩步法RT-PCR第一步實(shí)驗(yàn)配制的cDNA第一鏈合成試劑盒。本產(chǎn)品包含從RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈所需的所有試劑，其中包括MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、反應(yīng)緩沖液、引物、dNTP等。經(jīng)過突變改造的MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H活性缺失，減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA的降解，更容易獲得全長的cDNA。MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)定性強(qiáng)，可得高產(chǎn)量的cDNA，使用簡單方便。本系統(tǒng)對后續(xù)的PCR以及定量PCR試驗(yàn)兼容性高，適用各種PCR反應(yīng)的DNA聚合酶。 產(chǎn)品特點(diǎn)： RNase H-：經(jīng)突變的MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，RNase H活性缺失，更易獲得全長cDNA。 使用方便：試劑盒包含除RNA模板外的逆轉(zhuǎn)錄所需全部試劑。 保存：-20℃ |
DNA提取流程圖：
圖
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
快速真菌 50T 3-O-Methyl-Estrone 中文名：3-氧甲基基雌酮 分子式：C19H24O2 度：98.0%
快速H－E組織細(xì)胞及脫落細(xì)胞染液 Phosphate buffer 3-Amino-3-phenyl-1-propanol 中文名：3-氨基-3--1-丙 分子式：C9H13NO
跨膜蛋白100 英文名稱： Human ansmembrane protein 100 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： TMEM100 Ritonavir 中文名： 分子式：C37H48N6O5S2
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T Phenformin 中文名：鹽酸苯乙雙胍 分子式：C10H16ClN5
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T Phenformin 834-28-6 中文名：鹽酸苯乙雙胍 分子式：C10H16ClN5 度：98.0%
A66,p110α抑制劑 A66 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitPGF人血小板生長因子規(guī)格：48T/96T
SC-514;IKK-2抑制劑 SC514 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒 ，英文名： CK ELISA Kit
γ-環(huán)糊精 γ-Cyclodextrin 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA檢測試劑盒RatcoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 96T/48T
甲基倍他環(huán)糊精,2,6-二甲基-β-環(huán)糊精 Me-β-CD 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人不對稱二甲基精(ADMA)試劑盒 Human asymmeical dimethylarginine,ADMA ELISA Kit
埃博B；帕土匹龍 Epothilone B(EPO906, Patupilone) 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR RatThyroglobulin,TGELISAKit大鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
BMS-345541 BMS345541 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR L-谷氨酰-α-萘酰胺(L-Glamyl-α-naphthylamide)1克
IKK-16,選擇性IKK抑制劑 IKK16 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISA試劑盒豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
曲格列汀琥珀酸鹽 Trelagliptin succinate；SYR-472 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠肌生成抑制素(MSTN)ELISA試劑盒 ，英文名： MSTN ELISA Kit
2-[2-(2-t-Boc-氨基乙氧基)乙氧基]乙 2-[2-(2-t-Boc-aminoethoxy)ethoxy]ethanol 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口原裝 大鼠IX(FIX)ELISA檢測試劑盒RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit 96T/48T
2'-脫氧-2',2'-二氟核苷 2’,2’-Difluoro-2’-deoxyuridine 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口原裝,97% 人補(bǔ)體因子I(CFI)試劑盒 Human CFI ELISA Kit
高效cDNA第一鏈合成試劑盒血液過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性
組織過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性
化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒
細(xì)胞過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性
植物過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性比色法定量檢測試劑盒
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