詳細(xì)介紹
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本品是專用于染料法(SYBR GreenⅠ)實時熒光定量PCR的預(yù)混體系,濃度為2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料和Mg2+,操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉(zhuǎn)錄后的cDNA靶序列檢測。本品所含熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA相結(jié)合,使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標(biāo)記探針。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效減少在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增,酶的激活僅需在95℃孵育20s。整個PCR反應(yīng)過程比普通反應(yīng)可節(jié)省約40分鐘,大大縮短了PCR的反應(yīng)時間。*的PCR緩沖體系與熱啟動酶的組合,有效抑制了非特異產(chǎn)物的產(chǎn)生,并顯著提高PCR的擴(kuò)增效率。該產(chǎn)品應(yīng)用范圍廣,適用于普通和快速定量PCR程序,可適用于無需ROX校正的所有熒光定量PCR儀。 ??ROX染料用于校正定量PCR儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 擴(kuò)增儀。不同儀器的激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)有所不同,因此ROX染料的濃度必須與相應(yīng)的熒光定量PCR儀相匹配。 注意事項: 1、使用前請上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心后使用。 2、本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I,保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強(qiáng)光照射。 3、避免反復(fù)凍融本品,反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。本產(chǎn)品長期保存可置于-20℃,避光。如果在短期內(nèi)需要頻繁使用,可在2~8℃保存。 4、本品不能用于探針法熒光定量PCR。 儲存條件:-20℃,避免反復(fù)凍融 |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
BaFaSYBR Mixture | 5ml | GOY-F10298 |
DNA提取流程圖:
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒 48T 3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol 中文名:3-乙酰基-5α-雄烷二 分子式:C21H34O3
納米二氧化鈦 Ribavirin 36791-04-5 中文名:利巴韋林 分子式:C8H12N4O5
莫氏立克次體(RM)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T 3-Amino-3-phenylpropionic acid 中文名:C9H11NO2 分子式:C9H11NO2
膜聯(lián)蛋白5 英文名稱: Annexin 5 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ANXA-5 3β-Hydroxyporiferast-5-en-7-one 中文名: 分子式:C29H48O2
膜聯(lián)蛋白2 英文名稱: Annexin 2 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ANXA-2 Otophylloside B 中文名:青陽參苷B 分子式:C49H78O16
虎杖甙/虎杖苷/白藜蘆苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Polydatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatThromboxaneB2,TXB2ELISAKit大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
十八烷,1-十八(標(biāo)準(zhǔn)品) 1-Octadecanol 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 LOWRY蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒100
十八烷,1-十八 1-Octadecanol 質(zhì)量規(guī)格:>98% Porcineacetylcholine,ACHELISA試劑盒豬乙酰(ACh)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Ruxolitinib (INCB018424) Ruxolitinib (INCB018424) 質(zhì)量規(guī)格:>99% 小鼠基己糖苷酶Bβ(HEXβ)ELISA試劑盒 ,英文名: HEXβ ELISA Kit
MK-1775,MK1775 MK-1775 質(zhì)量規(guī)格:>98%,Wee1激酶抑制劑 人胸腺肽(Thymosin)ELISA檢測試劑盒HumahymosinELISAKit 96T/48T
PD184352 (CI-1040) PD-184352 (CI-1040) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,MEK1/2抑制劑 大鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒 Rat keratinocyte aocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit
2-脫氧-D-葡萄糖 2-Deoxy-D-glucose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 英文名稱RatSubstancePELISAKit大鼠P物質(zhì)(SP)規(guī)格:96T/48T
坎地沙坦 Candesartan 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 咖啡乙酰舒泛(acesulfameK)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20
Ruxolitinib(INCB018424) phosphate INCB018424) phosphate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,JAK1/2抑制劑 ELISAKitDyn人強(qiáng)啡肽規(guī)格:48T/96T
SB1317,TG02 SB-1317,TG-02 質(zhì)量規(guī)格:>97%,CDKs/JAK2 / FLT3抑制劑 小鼠基己糖苷酶Aα(HEXα)ELISA試劑盒 ,英文名: HEXα ELISA Kit
快速實時熒光定量PCR預(yù)混體系細(xì)胞半胱-3(CASPASE-3)活性比色法定量檢測試劑盒
組織半胱-2(CASPASE-2)活性熒光定量檢測試劑盒
細(xì)胞半胱-2(CASPASE-2)活性熒光定量檢測試劑盒
組織半胱-2(CASPASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞半胱-2(CASPASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。