詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
dTTP Solution | 250μl | GOY-F10278 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
dTTP即2’-deoxythymidine 5’-triphosphate,中文名為脫氧胸苷三磷酸,常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反應(yīng)、DNA測序、DNA標(biāo)記等各種常規(guī)分子生物學(xué)反應(yīng)。 分子式:C10H14N2O14P3Na3 分子量:548.1(酸形式的分子量為482.1) 大吸收波長:267nm。 本dTTP溶液用純水配制,并用高純度NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0,濃度為100mM,即100mmol/L。 本dTTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。 本dTTP溶液經(jīng)測試,可以直接用于PCR等各種常規(guī)分子生物學(xué)反應(yīng)。 儲存條件:-20℃。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISAKit Timosaponin AIII 41059-79-4 中文名:知母皂苷AIII 分子式:C39H64O13 度:98.5% 關(guān)鍵詞: 知母; 螺甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
人抗α-胞襯蛋白抗體IgGelisa試劑盒 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人抗α-胞襯蛋白抗體IgG試劑盒、人抗α-胞襯蛋白抗體IgGeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Aloe-emodin 中文名:蘆薈大黃素 分子式:C15H10O5
人晶體蛋白βelisa試劑盒 人晶體蛋白β試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人晶體蛋白β試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人晶體蛋白β試劑盒、人晶體蛋白βeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Periplogenin 514-39-6 中文名:杠柳苷元 分子式:C23H34O5
人金葡菌腸elisa試劑盒 人金葡菌腸試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人金葡菌腸試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人金葡菌腸試劑盒、人金葡菌腸elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Lonidamine 50264-69-2 中文名:氯尼達(dá)明 分子式:C15H10Cl2N2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISAKit 3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 中文名: 分子式:C17H23NO5 度:98.0%
A 83-01;A83-01 A8301 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA檢測試劑盒Ratansferrieceptor,TFRELISAKit 96T/48T
Amresco 進(jìn)分瓊脂粉 Agar 質(zhì)量規(guī)格:BR,進(jìn)分 人成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF-13)試劑盒 Human FGF-13 ELISA Kit
氟伏沙明 Fluvoxamine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,油狀 RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit大鼠氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
醋酸鋅(二水) Zinc acetate 質(zhì)量規(guī)格:AR,>98% JNK/SAPK(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
舒巴坦鈉 Sulbactam 質(zhì)量規(guī)格:BR,>99% PlaIndole-3-aceticacid,IAAELISA試劑盒植物吲哚乙酸(IAA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
舒巴坦鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulbactam 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒 ,英文名: TIMP-2 ELISA Kit
甘草酸(β型),18beta-甘草酸 18-beta-glycyrrheticacid 質(zhì)量規(guī)格:>98% 大鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISA檢測試劑盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit 96T/48T
甘草酸(β型),18beta-甘草酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 18-beta-glycyrrheticacid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)試劑盒 Human FGF10 ELISA Kit
OXOID胰蛋白胨 Tryptone 質(zhì)量規(guī)格:BR,進(jìn)口 Rattarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
β-萘黃酮 β-Naphthoflavone 質(zhì)量規(guī)格:>99%,進(jìn)分 JNK/SAPK蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25
dTTP溶液(100mM)組織硫氧還蛋白還原酶2(mito thioredoxin reductase 2)活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞硫氧還蛋白還原酶2(mito thioredoxin reductase 2)活性比色法定量檢測試劑盒
組織硫氧還蛋白還原酶1(cytosolic thioredoxin reductase 1)活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞硫氧還蛋白還原酶1(cytosolic thioredoxin reductase 1)活性比色法定量檢測試劑盒
組織硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reduct
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))