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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Fura-2 pentakis ester | 50微升 | GOY-F10143 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本品是常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。 用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測時，Fura-2 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fura-2 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在4-37℃孵育15-60分鐘，即可完成熒光探針的裝載。 本Fura-2 AM(鈣離子熒光探針)是配制于無水DMSO(anhydrous DMSO)中的儲存液，濃度為2mM。 分子式：C44H47N3O24 分子量：1001.9 Fura-2 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura-2 AM的熒光比較弱，大激發(fā)波長為369nm，大發(fā)射波長為 478nm，并且其熒光不會隨鈣離子濃度改變而改變。Fura-2 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura-2，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fura-2可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后在330-350nm激發(fā)光下可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，而在380nm激發(fā)光下則會導(dǎo)致熒光減弱。這樣就可以使用340nm和380nm這兩個熒光的比值來檢測細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。Fura-2和鈣離子結(jié)合后，大激發(fā)波長為335nm(大激發(fā)波長隨離子濃度的的不同而有所不同)，大發(fā)射波長為505nm。實(shí)際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為340nm，發(fā)射波長為510nm。如果做雙波長檢測，則推薦使用的激發(fā)波長為340nm和380nm。Fura-2的激發(fā)光譜參考下圖，不同曲線表示不同鈣離子濃度時的激發(fā)光譜。 Fura-2相對而言有較強(qiáng)的抗熒光淬滅能力，在熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備上可以連續(xù)檢測1小時而不明顯影響其熒光效果。 注意事項： 1. 本Fura-2 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。 2. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 儲存條件：-20℃，有效期6個月。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔血栓調(diào)節(jié)蛋白(rabbit TM) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Chlorotestosterone acetate 中文名：醋酸氯 分子式：C21H29ClO3 度：98.0%
兔血栓素B2elisa試劑盒 兔血栓素B2試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔血栓素B2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血栓素B2試劑盒、兔血栓素B2 elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 7-Acetoxy-4-methylcoumarin 中文名：7-乙酰氧基-4-甲基 分子式：C12H10O4 度：95.0%
兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒 5-Fluorouracil 51-21-8 中文名： 分子式：C4H3FN2O2 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
兔血栓素B2(TXB2)ELISAKit 4-Aminohippuric acid 61-78-9 中文名：4-氨基馬尿酸 分子式：C9H10N2O3
兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 5-Fluorouracil 51-21-8 中文名： 分子式：C4H3FN2O2
(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)) Lauric acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC) 英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格：96T/48T
神經(jīng)酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)) Nervonic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC) 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/線粒體)功能熒光檢測試劑盒20
十五烷酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)) Pentadecanoic Acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) ELISAKitTI人真胰島素規(guī)格：48T/96T
泛酸鈣一水合物(標(biāo)準(zhǔn)品) (+)-Pantothenic acid calcium salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP2)ELISA試劑盒 ，英文名： GCP2 ELISA Kit
山梨酸鉀(標(biāo)準(zhǔn)品) Potassium sorbate 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA檢測試劑盒HumanComplemefragme4b,C4bELISAKit 96T/48T
全氟辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析) Pentadecafluorooctanoic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析 大鼠血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)試劑盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AA,PDGF-AA ELISA kit
正辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC)) n-Octanoic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC) 英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格：96T/48T
蓖麻油酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%) Ricinoleic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/質(zhì)膜)功能熒光檢測試劑盒20
硬脂酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)) Stearic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) ELISAKitMEC/CCL28人粘膜相關(guān)上皮趨化因子規(guī)格：48T/96T
甜蜜素(標(biāo)準(zhǔn)品) Cyclamate 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)ELISA試劑盒 ，英文名： GMCSF/CSF2 ELISA Kit
細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)細(xì)胞BMK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織BLK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細(xì)胞BLK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細(xì)胞AX1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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