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小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法 英文名稱:Mouse anti-endothelial cell antibody,AECA ELISA Kit 檢測(cè)方法:elisa酶聯(lián)免疫分析法ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法。其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便。凡購(gòu)買本公司試劑盒非人為質(zhì)量問(wèn)題,收貨后十五個(gè)工作日內(nèi)包退換。
小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法一、標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法二、注意事項(xiàng)
1. 此試劑為體外檢測(cè)試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號(hào)的試劑不能混用。
2. 使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,
3. 濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請(qǐng)于37℃孵育15分鐘。
4. 濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請(qǐng)于37℃孵育15分鐘
5. 若24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),標(biāo)本可存放于2~8℃。不需及時(shí)實(shí)驗(yàn),標(biāo)本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
6. 在反復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低精確度,造成吸光度偏離的假像。
7. 加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動(dòng)微孔反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。
8. 試劑盒保存于2~8℃,請(qǐng)勿冷凍,有效期請(qǐng)見(jiàn)盒內(nèi)標(biāo)示。
三、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
2.準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等
3.濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
4.濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
5.用應(yīng)用樣品稀釋液來(lái)稀釋樣品,按照1:100的體積比來(lái)稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)
小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法操作步驟:
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
樹(shù)狀假絲酵母 Candida arborea
枝芽胞菌 Virgibacillus sp.
大鼠腎上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
小孢根霉 Rhizopus microsporus
考馬斯亮藍(lán)G-25010g國(guó)產(chǎn)
KB(人口腔表皮樣細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
費(fèi)氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii
抗生鏈霉菌 Streptomyces antibioticus
MFC-GFP(小鼠前胃細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記))5×106cells/瓶×2gersion
酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris
黃硬皮馬勃 Scleroderma flavidum
NCI-H446(人小細(xì)胞肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermophilus
康寧木霉
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14)5×106cells/瓶×2
II型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
黑木耳 Auricularia auricula
人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
Daudi(人淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
香菇 Lentinula edodes
熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
桿菌屬 Lactobacillus sp.
白色鏈孢囊菌 Streptosporangium album N-3-oxo-tetradec-7(Z)-enoyl-L-Homoserine lactone (1 mg)3-oxo-N-[(3S)-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-7-tetradecenamide; 3-oxo-C14:1-Δ7cis-(L)-HSL; N-3-oxo-tetradec-7(Z)-enoyl-L-Homoserine lactone
Cannabidiol dimethyl ether (50 mg)1,3-dimethoxy-2-[(1R,6R)-3-methyl-6-(1-methylethenyl)-2-cyclohexen-1-yl]-5-pentyl-benzene; Cannabidiol-2’,6’-dimethyl ether|CBDD; Cannabidiol dimethyl ether
SU 6656 (25 mg)2,3-dihydro-N,N-dimethyl-2-oxo-3-[(4,5,6,7-tetrahydro-1H-indol-2-yl)methylene]-1H-indole-5-sulfonamide; SU 6656
Oxalomalic Acid (sodium salt) (5 mg)3-carboxy-3-deoxy-2-pentulosaric acid, trisodium salt; Oxalomalic Acid (sodium salt)
13,14-dihydro-15(R)-Prostaglandin E1 (10 mg)9-oxo-11。alpha。,15R-dihydroxy-prostan-1-oic acid; 13,14-dihydro-15(R)-PGE1; 13,14-dihydro-15(R)-Prostaglandin E1
CAY10408 (5 mg)9-oxo-11。alpha。,16R-dihydroxy-17-cyclobutyl-5Z,13E-dien-1-oic acid; CAY10408
JWH 149 (5 mg)(4-methyl-1-naphthalenyl)(2-methyl-1-pentyl-1H-indol-3-yl)-methanone; JWH 149
15(S)-15-methyl Prostaglandin E2 (500 ug)9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-15-methyl-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15(S)-15-methyl PGE2; 15(S)-15-methyl Prostaglandin E2
Prostaglandin F2α Alcohol (5 mg)1,9。alpha。,11。alpha。,15S-tetrahydroxyprosta-5Z,13E-diene; AGN190190|PGF2α-OH|ZK 62717; Prostaglandin F2α Alcohol
2,3-dinor-11β-Prostaglandin F2α (500 ug)9α,11β,15S-trihydroxy-2,3-dinor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 2,3-dinor-11β-PGF2α|2,3-dinor-11-epi PGF2α; 2,3-dinor-11β-Prostaglandin F2α
小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法15(S)-Latanoprost (50 mg)9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-17-phenyl-18,19,20-trinor-prost-5Z-en-1-oic acid, isopropyl ester; 15-epi Latanoprost; 15(S)-Latanoprost
Prostaglandin I2 (sodium salt) (25 mg)6,9α-epoxy-11α,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid, monosodium salt; Epoprostenol|Prostacyclin|PGI2; Prostaglandin I2 (sodium salt)
20-carboxy Leukotriene B4 (100 ug)5S,12R-dihydroxy-6Z,8E,10E,14Z-eicosatetraene-1,20-dioic acid; 20-carboxy LTB4; 20-carboxy Leukotriene B4