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大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法 英文名稱(chēng):Rat P-Selectin ELISA Kit 檢測(cè)方法:elisa酶聯(lián)免疫分析法ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法。其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便。凡購(gòu)買(mǎi)本公司試劑盒非人為質(zhì)量問(wèn)題,收貨后十五個(gè)工作日內(nèi)包退換。
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法一、標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法二、注意事項(xiàng)
1. 此試劑為體外檢測(cè)試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號(hào)的試劑不能混用。
2. 使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,
3. 濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請(qǐng)于37℃孵育15分鐘。
4. 濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請(qǐng)于37℃孵育15分鐘
5. 若24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),標(biāo)本可存放于2~8℃。不需及時(shí)實(shí)驗(yàn),標(biāo)本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
6. 在反復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低精確度,造成吸光度偏離的假像。
7. 加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動(dòng)微孔反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。
8. 試劑盒保存于2~8℃,請(qǐng)勿冷凍,有效期請(qǐng)見(jiàn)盒內(nèi)標(biāo)示。
三、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
2.準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等
3.濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
4.濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
5.用應(yīng)用樣品稀釋液來(lái)稀釋樣品,按照1:100的體積比來(lái)稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法操作步驟:
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
傘枝犁霉 Absidia corymbifera
BRL-3A(大鼠正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
異常漢遜酵母異常變種 Hansenula anomala var. anomala
大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
中國(guó)臺(tái)灣根霉 Rhizopus formosensis
嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
黑曲霉變種 Aspergillus niger var.
酒假絲酵母 Candida kefyr
鹽水球菌 Salinococcus sp.
解脂亞羅酵母 Yarrowia lipolytica
U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
GBC-SD, 人膽囊細(xì)胞
小金色鏈霉菌 Streptomyces microaureus
假單胞菌 Pseudomonas sp.
PANC-1, 人胰腺細(xì)胞gersion
蘇云金芽胞桿菌日本亞種 Bacillus thuringiensis subsp. japanensis
A549/DDP, 人肺腺耐藥細(xì)胞株 Human
肺英文名稱(chēng):Lewis瘤
伯頓畢赤酵母 Pichia burtonii
EL4(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型 Fusarium oxysporium f. sp. cucumerinum
檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum D-α-Hydroxyglutaric Acid (sodium salt) (250 mg)D-2-HG|D-2-Hydroxyglutaric Acid; 2R-hydroxy-pentanedioic acid, disodium salt
I-BET762 (25 mg)GSK525762A; (S)-2-(6-(4-chlorophenyl)-8-methoxy-4H-benzo[f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-4-yl)-N-ethylacetamide
(±)18-HEPE (25 ug)(±)-18-hydroxy-5Z,8Z,11Z,14Z,16E-eicosapentaenoic acid; (±)18-HEPE
(±)8,9-DHET (50 ug)(±)8,9-dihydroxy-5Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid; (±)8,9-DiHETrE; (±)8,9-DHET
D609 (potassium salt) (10 mg)Tricyclodecan-9-yl xanthogenate; O-(octahydro-4,7-methaH-inden-5-yl) ester, carbonodithioic acid, monopotassium salt
RH-34 (1 mg)3-[2-[[(2-methoxyphenyl)methyl]amino]ethyl]-2,4(1H,3H)-quinazolinedione
SANT 1 (1 mg)N-
GSK 429286A (1 mg)N-(6-fluoro-1H-indazol-5-yl)-1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-6-oxo-4-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-3-pyridinecarboxamide
α-Pyrrolidinobutiothiophenone (hydrochloride) (10 mg)α-PBT; 2-(pyrrolidin-1-yl)-1-(thiophen-2-yl)butan-1-one, monohydrochloride
Carvedilol (250 mg)BM 14190|Dilatrend|SKF 105517|Talliton; 1-(9H-carbazol-4-yloxy)-3-[[2-(2-methoxyphenoxy)ethyl]amino]-2-propanol
ATM4 4-acetoxy analog (5 mg)N-[2-[5-(acetyloxy)-3,6-dimethoxy-1-phenanthrenyl]ethyl]-N-methyl-acetamide
Isoproterenol (hydrochloride) (100 mg)Isoprenaline|NSC 37745|NSC 89747; 4-[1-hydroxy-2-[(1-methylethyl)amino]ethyl], monohydrochloride
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)方法4-Methoxyamphetamine (hydrochloride) (exempt preparation) (1 mg)4-MA|PMA|p-MA|para-Methoxyamphetamine; 4-methoxy-α-methyl-benzeneethanamine, monohydrochloride
Nortriptyline (hydrochloride) (50 mg)Acetexa|Pamelor; 3-(10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5-ylidene)-N-methyl-1-propanamine, monohydrochloride
Metolazone (10 mg)SR 720-22|Zaroxolyn; 7-chloro-1,2,3,4-tetrahydro-2-methyl-3-(2-methylphenyl)-4-oxo-6-quinazolinesulfonamide