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          大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞

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          • 型號
          • 品牌 R&D/美國
          • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
          • 所在地 上海市

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          更新時間:2022-04-13 11:50:21瀏覽次數(shù):229

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
          貨號 GOY-01X1268 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
          主要用途 僅供科研使用    
          大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞公司其它各種產(chǎn)品調(diào)解因子6抗體 RGAG4蛋白抗體
          孕激素受體β(MPRβ)抗體 RFTN2蛋白抗體
          前列腺素F2a受體抗體PGF2αR RFESD蛋白抗體
          神經(jīng)叢蛋白B3抗體 RET指蛋白樣2/3抗體
          絲/蛋白PCTK2抗體 RecQ解旋酶樣蛋白5抗體

          詳細(xì)介紹

          冷凍保存細(xì)胞之方法?
          冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(或隔夜)液氮槽vaporphase 長期儲存。
          冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

          圖片13.jpg

          產(chǎn)品屬性:

          產(chǎn)品名稱

          大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞

          規(guī)格

          5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

          貨號

          GOY-01X1268

          名稱    大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞
          2.組織來源:皮膚組織

          3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

          4.細(xì)胞簡介:

          大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自真皮組織;真皮,位于表皮深層,向下與皮下組織相連,真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維,使皮膚既有彈性,又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細(xì)胞(MEC)在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域,由于表皮細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟,人們對這兩種細(xì)胞早已進(jìn)行了大量深入的研究。與之相比,對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細(xì)胞——真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞,則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。

          5.方法簡介:

          公司實驗室分離的大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

          6.質(zhì)量檢測:

          公司實驗室分離的大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

          7.培養(yǎng)信息:

          包被條件 PLL0.1mg/ml),明膠(0.1%

          培養(yǎng)基 FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin

          換液頻率 2-3天換液一次

          生長特性 貼壁

          細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

          傳代特性 可傳2-3

          消化液 0.25%

          培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

          培養(yǎng)操作:
          1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
          2
          )細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
          1.
          棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
          2.
          1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
          3.
          6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
          4.
          將細(xì)胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
          3
          )細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
          1.
          細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
          2. 4 min 1000rpm
          離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
          3.
          將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
          深黃被孢霉   玉蕈、真姬菇

          雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)   惡臭假單胞菌

          胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基200ml/   大腸埃希菌CMCC44102凍干粉

          植物乳桿菌植物亞種   粘紅酵母

          胰蛋白胨大豆瓊脂表面培養(yǎng)基60mm用于普通表面或醇類與酚類消毒劑的物表   米氏硫胺素芽孢桿菌
          鹿環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa檢測試劑盒

          鹿紅細(xì)胞膜蛋白(EMP)elisa檢測試劑盒免費代測

          鹿次氧化酶elisa檢測試劑盒

          鹿γ干擾素(IFNG)elisa檢測試劑盒

          類人猿elisa檢測試劑盒
          大鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞無毒環(huán)保蘇木素-伊紅H-E染液 50ml×4 250ml×4 500ml×4

          無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 10

          無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒 50

          無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒 50

          五、蛋白組學(xué)整體解決方案——Western Blot
          實驗報告:
          產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
          1
          、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
          2
          、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
          3
          、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
          4
          、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
          5
          、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
          二、免疫熒光鑒定:
          1
          、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
          2
          、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min
          3
          、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
          4
          、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
          5
          、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
          6
          、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。


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