細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
名稱 卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞
2.組織來源:卵巢組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自卵巢組織;卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與相同,僅左側(cè)發(fā)育(右側(cè)已退化),呈葡萄狀,均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡,卵泡呈黃色,卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢,但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu),而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官,它的外表有一層上皮組織,其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分,主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成;髓質(zhì)位于中央,由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7~9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米。基膜外面有薄層結(jié)締組織,其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的微血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,較粗的微血管由2~3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的微血管,內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)微血管。血管內(nèi)皮細(xì)胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。近年來血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn),不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞在生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別,而同是微血管內(nèi)皮細(xì)胞,它們又存在器官和組織的特異性。
5.方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%胰消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
炭黑曲霉 費(fèi)氏志賀氏菌(福氏志賀氏菌)
變綠粘球菌 斯氏油脂酵母
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml 金頂側(cè)耳、榆黃磨、金頂磨
平展米曲霉(米曲霉平展變種) 皺褶假絲酵母
熒光假單胞菌 菲律賓鏈霉菌
人AP-5復(fù)合物β亞基(PP1030)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人alpha突觸核蛋白(淀粉樣前體非A4成分蛋白)低聚物(SNCA oligomer)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人Alpha-D 生育酚/(Alpha-D TPL)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人alpha-1腎上能受體(ADRA1)IgG抗體elisa分析檢測(cè)試劑盒
人AFG3樣蛋白2(AFG3L2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠γ氨基丁酸(GABA)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠γ-氨基丁酸(GABA)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠γ-氨基丁酸(GABA)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠γ氨基丁酸(GABA)自身抗體IgG elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠γ氨基丁酸(GABA)自身抗體IgG elisa檢測(cè)試劑盒
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