詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X1358 |
名稱 小鼠羊膜胚胎細胞
2.組織來源:胎盤組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:
小鼠胚胎羊膜細胞分離自羊膜組織;羊膜為單層上皮細胞互相連接構(gòu)成的薄膜。單層上皮細胞具有分泌羊水的作用。隨著胚胎的生長發(fā)育,羊膜與絨毛密切緊貼,形成胎膜。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴大而呈半透明的薄膜,無血管,富有韌性(胎膜也就是羊膜腔的囊壁)。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤的兒體面,并不深入胎盤組織中,隨著的進展羊膜腔逐漸擴大,占據(jù)整個子宮腔,羊膜是胎膜內(nèi)一層,是一層半透明的薄膜,與覆蓋在胎盤、臍帶的羊膜層相連接。羊膜是胎盤的內(nèi)層,與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,含有眼表上皮細胞,包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì),其光滑,無血管、神經(jīng)及淋巴,具有一定的彈性,厚0.02~0.5mm,在電鏡下,其分為五層:上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,主要為i、iii、iv、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份,正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì)。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成,均具有多分化潛能,可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠羊膜胚胎細胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠羊膜胚胎細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
天凈沙核酸濃縮劑30mL 免質(zhì)粒提取篩選試劑盒1000 次
柱式 RNA 純化試劑盒50 次 免疫蛋白清除劑20 次
低載量 PCR 片段純化試劑盒50 次 免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒 100 次
低載量 PCR 片段純化試劑盒100 次 免 RNA 提取 FFPE RT-PCR 試劑盒30 次
高載量 PCR 片段純化試劑盒50 次 免 DNA 提取 PCR 試劑盒100 次
人Corin elisa分析檢測試劑盒
人COP9 結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2(擬南芥)(COPS2)elisa分析檢測試劑盒
人COLL2-1NO2 elisa分析檢測試劑盒
人Coll2-1 elisa分析檢測試劑盒
人c-jun elisa分析檢測試劑盒
小鼠羊膜胚胎細胞小鼠白介素27(IL-27)elisa檢測試劑盒
小鼠白介素27(IL-27)elisa檢測試劑盒
小鼠白介素27(IL-27)elisa檢測試劑盒免費代測
小鼠白介素28(IL-28)elisa分析檢測試劑盒
小鼠白介素28(IL-28)elisa檢測試劑盒
實驗報告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。