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          GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞10×100μL現貨

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          • 所在地 上海市

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          更新時間:2017-02-12 08:46:48瀏覽次數:1037

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          產品簡介

          GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞10×100μL現貨運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存,避免反復凍融,有效期半年。

          詳細介紹

          GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞10×100μL現貨產品及特點:


          本產品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細胞,適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株,用于產生重組 Bacmid。使用 pUC19 質粒檢測,本產品轉化效率可達 107CFU/μg。 DH10Bac 細胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個 mini-F 復制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點和 lac Zα-互補因子。輔助質粒包含 tns ABCD 區(qū)域,該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質粒插入親本 Bacmid 靶位點所需要的轉座蛋白。供體如 pFastBac 系列質粒(pFastBac1,pFastBacDual 等)含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂,Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動子、多克隆位點和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號。當含有靶基因 pFastBac 的重組質粒轉化到 DH10Bac 細胞后,發(fā)生重組后就可產生重組 Bacmid,提取純化重組 Bacmid 轉染昆蟲細胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產生昆蟲病毒。此外,DH10Bac 細胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產物可以實現β-半乳糖苷酶的α-互補現象,用于重組 bacmid 的藍白斑篩選。菌株基因型為:F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
          GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞10×100μL現貨規(guī)格及成分:

          GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞10×100μL現貨使用方法:
          1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板:50 μ g/mL Kanamycin,7 μ g/mL gentamicin,10 μg/mL tetracycline,100 μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
          2. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100 μL,可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以 100 μL 感受態(tài)細胞為例。
          3. 待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入 1-10 ng 重組質粒,用移液器輕輕吹打混勻,冰浴 30 分鐘。
          4. 42℃熱擊 90 秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置 2-3 分鐘。
          5. 每個離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC(不含抗生素),混勻后置于 37℃ 搖床, 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時。
          6. 用 SOC 培養(yǎng)基進行 10 倍梯度稀釋,如分成 3 個稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
          7. 取 100 μL 的各個梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后,倒置平板, 37℃培養(yǎng) 24-48 小時。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃,視平板上菌落生長情況決定去留。

          石刁柏(蘆筍)擬莖點霉 Phomopsis asparagi
          人成巨核細胞白血病細胞英文名稱:Daudi
          普雷恩毛霉 Mucor prainii
          膠韌革菌 Gloeostereum incarnatum
          Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)規(guī)格:10000次
          大鼠食管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
          樹狀黃桿菌 Flavobacterium arborescens
          中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
          NCI-H524(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
          桿菌屬 Lactobacillus sp.
          苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
          NCI-H524(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2gersionmUkG1
          pACEBac2
          pAG415GAL-ccdB-EYFP(pAG415GALccdBEYFP)
          pAmCyan1-N1(pAmCyan1N1)
          pBact-myc(pBactmyc)
          pBI Tet(pBITet)(60908-762)
          pBMTBX-3(pBMTBX3)
          pCAB42
          pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro(pCDHCMVMCSEF1Puro)(60908-1363)
          pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative(pcDNA6.2GWEmGFPmiRnegative)
          pCMV-3Tag-1C(pCMV3Tag1C)
          pCMV6-A-Hygro(pCMV6AHygro)
          pCoBlast
          pCYM1
          pDO17
          pEarleyGate 204(pEarleyGate204)
          pEMBLYe24
          GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞10×100μL現貨pET-32a(+)(pET32a)(60908- 2801)y
          pET-HisK(pETHisK)
          蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Kenyae
          金色橫裂鏈霉菌 Streptomyces aureosegmentosus
          異常漢遜酵母 Hansenula anomala
          真姬菇 Hypsizigus marmoreus
          B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2

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