詳細(xì)介紹
T1 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨產(chǎn)品及特點(diǎn):
本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞,適用于昆蟲(chóng)桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株,用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè),本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。 DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Zα-互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域,該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒(pFastBac1,pFastBacDual 等)含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂,Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲(chóng)病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后,發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid,提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲(chóng)病毒。此外,DH10Bac 細(xì)胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)現(xiàn)象,用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。菌株基因型為:F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
T1 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨規(guī)格及成分:
T1 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨使用方法:
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板:50 μ g/mL Kanamycin,7 μ g/mL gentamicin,10 μg/mL tetracycline,100 μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒,用移液器輕輕吹打混勻,冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 μL 無(wú)菌的 SOC(不含抗生素),混勻后置于 37℃ 搖床, 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋,如分成 3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后,倒置平板, 37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃,視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
猴菌
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
FaDu(人咽鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
雙孢蘑菇
小鼠晶狀體上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)ELISA Kit
人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)ELISA Kit
人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)ELISA Kit
人端粒酶(TE)ELISA Kit
人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA Kit
人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)ELISA Kit
人激肽釋放酶11(KLK 11)ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit
人抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV)ELISA Kit
人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit
人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA Kit
人綠膿桿菌外毒素A(PEA)ELISA Kit
人尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA Kit
人清道夫受體B(SRB/CD36)ELISA Kit
人腎上腺素(EPI)ELISA Kit
人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA Kit
人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
T1 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
WISH(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
Jurkat/人外周血白血病T細(xì)胞株國(guó)產(chǎn)
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae