詳細(xì)介紹
真菌種屬鑒定 PCR Mix 7100 次特點(diǎn)使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測(cè)是否得到預(yù)計(jì)長(zhǎng)度的 PCR 產(chǎn)物。
真菌種屬鑒定 PCR Mix 7100 次特點(diǎn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
pMBP-P(pMBPP)(60908-4910)y
pMCSG33
pMCSG68
pmKate2-N(pmKate2N)
pMT/BiP/V5-His B(pMTBiPV5HisB)
pNO1517
pPAmCherry1-C1
pPD95_18(pPD9518)
pPRIME-CMV-dsRed-recipient(pPRIMECMVdsRedrecipient)
pQCXP CMV/TO DEST(pQCXPCMVTODEST) (w360-1)
pRc/RSV(pRcRSV)
pRL-TK(pRLTK)(60908-5940)y
pRX-3(pRX3)
pSG111RTE(大鼠氣管上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
青藤堿規(guī)格:20mg/支;98%
大鼠子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
涇陽(yáng)鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis
PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
NIH/3T3(小鼠胚胎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus
日本根霉
人結(jié)腸細(xì)胞英文名稱:CW-2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
果形正青霉 Micromonospora violaceofusca
蘇云金芽胞桿菌日本亞種 Bacillus thuringiensis subsp. japanensis
大鼠晶狀體上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
蛹蟲草(北冬蟲夏草,北蟲草) Cordyceps militaris
香菇 Lentinula edodes
293(人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
pSM17
pSuperRetro control(pSuperRetrocontrol)
pTAG-1(pTAG1)
pTK-Hyg(pTKHyg)(60908-6550)
pTRV2(60908-6688)