詳細介紹
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次*使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預(yù)計長度的 PCR 產(chǎn)物。
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次*產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
Flexibacter canadensis medium
Haloarchaeum salinum medium
Hydrogenobacter acidophilus medium
Manning medium
Methanobrevibacter curvatus medium
Methylophaga medium 1403
Modified sea water agar
Onr7a medium
Pseudomonas indigofera medium
Rolled oats mineral medium
Spirochaeta smaragdinae medium
Syntrophomonas zehnderi medium
Thermotoga elfii medium苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
NRK-52E,大鼠腎細胞gersion
嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus
大豆慢生根瘤菌
人結(jié)腸平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
龜裂鏈霉菌 Bacillus mucilaginosus
蘇云金芽胞桿菌庫爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki
小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
香菇屬 Lentinula sp.
香菇 Lentinula edodes
293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細胞系
藤黃節(jié)桿菌 Arthrobacter luteus
苜蓿中華根瘤菌
RBE, 人肝膽管細胞gersion
嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
大麗輪枝孢 Verticillium dahliae
Trypticase soy agar na-mg
Z medium
大腸桿菌JM105菌種
22RV1細胞株
BALB/C 3T3細胞株