詳細(xì)介紹
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次成分使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測(cè)是否得到預(yù)計(jì)長(zhǎng)度的 PCR 產(chǎn)物。
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次成分產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
pcDNA3.1(+)/CAT(pcDNA3.1CAT) (60908-1450)
pcDNA6/myc-His A(pcDNA6mycHisA)
pCMV-3Tag-9(pCMV3Tag9)
pCMV6-AC-HA-His(pCMV6ACHAHis)
pcopneo
pDB.GST
pDR540
pECFP-MEM (pECFPMEM)(60908-2551)
pENTR3C(60908-2730)
pET-3d(pET3d,pET-3d(+)(60908-2739)y
pET22b-CPDSacI(pET22bCPDSacI)
pFA6a-13Myc-His3MX6(pFA6a13MycHis3MX6)
pFD666
pGAD53m(60908-3446)
pGEX-5X-2(pGEX5X2)
pGL4.37[luc2P ARE Hygro](60908-4001)
pGWF1
phRG-TK毛柄金錢(qián)菌(金針菇) Flammulina velutipes
蘇云金芽胞桿菌莫氏變種 Bacillus thuringiensis var. merrisoni
III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL
托姆青霉 Penicillium thomii
玫瑰小雙孢菌 Microbispora rosea
C127(小鼠腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii
SW1116(人結(jié)腸腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
粗柄羊肚菌 Morchella crassipas
人小氣道平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 Human
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
Calu-1(人肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
爪哇根霉 Rhizopus javanicus
尿素八疊球菌 Sarcina ureae
DAB Kit/DAB顯色試劑盒20m、60ml國(guó)產(chǎn)
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
鏈輪枝菌 Streptoverticillium sp.
pIEx-10(pIEx10)
pIZ/V5-HIS(pIZV5HIS)(60908-4341)
pJSC73
pL1