詳細介紹
dCTP 溶液,2.5mM2mL特點使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產(chǎn)物。
dCTP 溶液,2.5mM2mL特點產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
pLA2920
pLenti6 capTEV-CT-DEST(pLenti6capTEVCTDEST)
pLOX-TERT-iresTK(pLOXTERTiresTK)(60908-4615)
pLVX-PTuner Green(pLVXPTunerGreen)
pmCherry-1(pmCherry1)
pMCSG37
pMCSG73
pMM121
pMUTIN4 (60908-5125)
pNYCOMPS-LIC-FH10T+ (N term) - linearized
pPCR-Script Cam(pPCRScriptCam)
pPD95_79(pPD9579)
pPro18-km(pPro18km)
pQE-18(pQE18)
pRET.IL.PGK-TK人胰腺細胞英文名稱:PANC-1
人前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
栗褐鏈霉菌 Streptomyces badius
EPC, 大鼠血管內皮祖細胞
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
玉蜀黍赤霉 Gibberella zeae
肝細胞HBV病毒株英文名稱:HEPG2.2.15
熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
小鼠支氣管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
人大隱靜脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL
葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum
大腸桿菌 Escherichia coli
Chang liver (CCL13) (人張氏肝細胞)5×106cells/瓶×2
酒假絲酵母 Candida kefyr
pROK2
pSAR-MT(pSARMT)
pShuttle-CMV lacZ(pShuttleCMVlacZ)