詳細(xì)介紹
MgCl2溶液,25mM,PCR 級5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
MgCl2溶液,25mM,PCR 級5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預(yù)計(jì)長度的 PCR 產(chǎn)物。
pAG424GPD-ccdB-EYFP(pAG424GPDccdBEYFP)
pARO191
pBADZ-His6Cre(pBADZHis6Cre)(60908-621)
pBiFC-CC155(pBiFCCC155)(60908-785)
pBPV69T 43-1(pBPV69T431)
pCAMBIA1303(60908-1250)y
pcDNA3.1(-)/GFP(pcDNA3.1GFP)(60908-1430y)
pCDNATM6/Myc-His-A(pCDNATM6MycHisA)
pCMV-CLuc 2(pCMVCLuc2)
pCMV6-AC-mGFP(pCMV6ACmGFP)
pCP2-4-10(pCP2410)
pdBPV-MMTneo 342-12(pdBPVMMTneo342-12)
pDsRed-ER(pDsRedER)(60908-2431y)
pECV25酸鏈球菌 Lactococcus lactis
HCT116/人結(jié)腸細(xì)胞株國產(chǎn)
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
米曲霉 Aspergillus oryzae
大鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp.lactis
核盤菌
小鼠骨肉瘤英文名稱:LM-8
HCT116, 人結(jié)直腸細(xì)胞
鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus
臭曲霉 Aspergillus foetidus
黑曲霉 Aspergillus niger
大鼠胰腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
MV3(人黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
pET DEST42 Gateway(pETDEST42Gateway)
pET-41b(+)(pET41b)(60908-2807b)y
pET28a-CPDSalI(pET28aCPDSalI)
pFA6a-5FLAG-kanMX6(pFA6a5FLAGkanMX6)
pFL34