非洲綠猴腎細(xì)胞；GL-37說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 非洲綠猴腎細(xì)胞；GL-37說明書
形態(tài)特性 
生長特性 貼壁生長
特征特性   
培養(yǎng)條件   
傳代方法 
傳代情況 
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
COLO 201(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MCF 7B(人腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
KG-1(人急性骨髓性白血病細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
HeLa全細(xì)胞裂解液    100μg        100μg    
中性紅染色液    規(guī)格：        100ml    
CHL(倉鼠肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠角膜內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽細(xì)胞系                
人子宮頸表細(xì)胞    英文名稱：        ME-180    
Schenk&Hildebrandt Vitamin Mix    BR    國產(chǎn)/進(jìn)口    100毫升    
RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞        gersion        
小鼠骨髓瘤淋巴細(xì)胞    英文名稱：        N-H    
梭菌鑒別瓊脂/DCA    干燥食品亞硫酸鹽還原梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
 正常細(xì)胞                
人胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
EEM培養(yǎng)基/EEM Medium    致病性大腸桿菌和腸桿菌的增菌培養(yǎng)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克 
細(xì)膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒    100929-50    50 次
250 mL    Zetterqvist 固定液    
250mg    鏈霉蛋白酶 E    
96 支    10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝長尖 )    
40μL    Tubulin-Tracker Red( 微管紅色熒光探針 )    
100U    β- 瓊脂糖酶Ⅰ    
抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基測試盒 ( 比色法 )    18-0660-50    50 T
超雜交液 A（不含甲酰胺）    80915A-100    100mL
5次    TdT 加尾法 DNA 生物素標(biāo)記試劑盒    
100mL    非凍型拭子病毒保存液    
5mg    衣    
100 次    WST-1 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒    
金精三羧酸    CAS4431-00-9    5g
lambda(λ)DNA    90407B-5    5μg
5mL    小膠質(zhì)細(xì)胞生長因子    
1只    硅膠膜離心吸附柱 ( 大提 ) 收集管    
250g    聚乙二醇 8000    
25μL    Cy5-dCTP 溶液，10mM    
9,10- 二甲基 -1,2 苯并蒽    CAS57-97-6    100g
TB1 種    12-256    1mL
100 次    一步法質(zhì)粒 DNAout 2.0    
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