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中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng) 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 1957年，Puck TT從成年中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢的活檢組織建立了CHO細(xì)胞，CHO-K1是CHO的一個(gè)亞克隆。CHO-K1的生長(zhǎng)需要脯氨酸。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1：3傳代；3-4天一次
傳代情況 PN3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體 20-26
使用權(quán)限 A類(lèi)
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1說(shuō)明書(shū)質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1說(shuō)明書(shū)操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
100mg 堿性磷酸酶標(biāo)記親和素
100g 檸檬酸，二水
1000μL 山羊抗兔 IgG(H+L)，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記
肌球蛋白 CAS100684-32-0 100mg
小鼠抗 c-Myc 標(biāo)簽單抗 130575-100 100μL
250mg 直鏈淀粉
10g L- 苯丙氨酸
250g 麥芽浸粉
10×100μL T1 感受態(tài)細(xì)胞
丙烯葡聚糖凝膠 S-100 HR CAS65546-95-4 150mL
亞氨二介質(zhì) 131059-10 10mL
50 次 柱式血清血漿 RNAout
25g 硫柳汞
100g 瓊脂糖
1000 支 1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝帶芯 )
兔肌動(dòng)蛋白 CAS51005-14-2 1mg
組蛋白 3.1 小鼠單抗 130571-1000 1000μL
非凍型血液 RNA 保存液 111202-100 100mL
1 g 糜蛋白酶原
5g 3- 苯甲酰丙酸
5mL 滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子
100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚磷酸 (BCIP)
人基因組 DNA 混合液 131034-100 100μg
分子雜交爐 120930-1 1臺(tái)
直接紅81 分子式： 675.6 分子量： C29H19N5Na2O8S2 英文名稱(chēng)： Direct red 81 CAS號(hào)： 2610/11/9
日落黃 分子式： 452.37 分子量： C16H10N2Na2O7S2 英文名稱(chēng)： Sunset yellow CAS號(hào)： 2783-94-0
酸性嫩黃G 分子式： 380.35 分子量： C16H13N4NaO4S 英文名稱(chēng)： Acid yellow G CAS號(hào)： 6359-82-6
(3-BroMophenyl)(2,4,6-triMethylphenyl)iodoniuM triflate 分子式： 551.2 分子量： C16H15BrF3IO3S 英文名稱(chēng)： (3-BroMophenyl) (2,4,6-triMethylphenyl) triflate iodoniuM CAS號(hào)： 1203709-76-5
4-(3-三氟甲基)哌啶鹽酸鹽 分子式： 265.7 分子量： C12H15ClF3N 英文名稱(chēng)： 4- (3- three trifluoromethyl phenyl) piperidine hydrochloride CAS號(hào)： 6652-16-0
L-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽 分子式： 173.25 分子量： C9H19NO2 英文名稱(chēng)： L- l-norvaline tert butyl ester hydrochloride CAS號(hào)： 13211-31-9
溴百里香酚蘭 分子式： 624.38 分子量： C27H28Br2O5S 英文名稱(chēng)： Bromothymol blue CAS號(hào)： 76-59-5
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1說(shuō)明書(shū)蘇丹Ⅳ 分子式： 380.44 分子量： C24H20N4O 英文名稱(chēng)： Su Dan CAS號(hào)： 85-83-6
酸性紫7 分子式： 566.47 分子量： C20H16N4Na2O9S2 英文名稱(chēng)： Acid violet 7 CAS號(hào)： 4321-69-1
氯酚紅 分子式： 423.27 分子量： C19H12Cl2O5S 英文名稱(chēng)： Chlorophenol red CAS號(hào)： 4430-20-0
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