詳細(xì)介紹
小鼠胚胎細(xì)胞;BABL/C-E圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠胚胎細(xì)胞;BABL/C-E圖片
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一13-14天的小鼠胚胎組織。2000年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件 M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
人孕激試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人孕激試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人孕激試劑盒、人孕激elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人高血樣試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人高血樣試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人高血樣試劑盒、人高血樣elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人血小板相關(guān)補(bǔ)體3試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人血小板相關(guān)補(bǔ)體3試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人血小板相關(guān)補(bǔ)體3試劑盒、人血小板相關(guān)補(bǔ)體3 elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人血管生成樣3試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人血管生成樣3試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人血管生成樣3試劑盒、人血管生成樣3 elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化試劑盒、人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人膀胱瘤抗原試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人膀胱瘤抗原試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人膀胱瘤抗原試劑盒、人膀胱瘤抗原elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人內(nèi)脂試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人內(nèi)脂試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人內(nèi)脂試劑盒、人內(nèi)脂elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人美麗線蟲(chóng)凋亡基因試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人美麗線蟲(chóng)凋亡基因試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人美麗線蟲(chóng)凋亡基因試劑盒、人美麗線蟲(chóng)凋亡基因elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。
人磷脂酰肌醇聚3試劑盒規(guī)格型號(hào):96T/48T人磷脂酰肌醇聚3試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人磷脂酰肌醇聚3試劑盒、人磷脂酰肌醇聚3 elisa試劑盒保存條件:2-8℃保質(zhì)期:6個(gè)月。50 次 非酶多糖清除劑 (DNA )
5g 天狼猩紅
100 次 植物種屬鑒定 PCR Mix 10
鐵氰化 500g CAS13746-66-2
一管式 TMB 顯色液 B ( 沉淀型 ) 100mL 91101B-100
非酶多糖清除劑 (RNA ) 10mL 60204-10
100mL Oligo(dT) 再生溶液
50 次 Caspase 2 檢測(cè)試劑盒
15 次 血清白蛋白清除劑
50mL 丁基硫介質(zhì)
RecA 蛋白 200μg 130661-200
EcoR I-Not I-BamH I 接頭 1nmol 130988-1
100μL 小鼠抗 CBP 標(biāo)簽單抗
1.5mL 即用型高保真 PCR 試劑盒
500g 胰蛋白胨
2000U BamHI
100mL 重蒸酚
Zinquin 乙酯 5mg 22-0620-5
血液 DNAout 150 次 3671-150
1g 青 G 鹽
1mL C43(DE3) 菌種
1.5mL RNase A 溶液,10mg/mL