詳細(xì)介紹
雜交瘤細(xì)胞株;5H1E9E8D7H12圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng) 雜交瘤細(xì)胞株;5H1E9E8D7H12圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬專(zhuān)利保藏,其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買(mǎi)到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以?xún)?nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀(guān)察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
phospho-RAD9(Ser387) 磷酸化細(xì)胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-HRH1(Ser398) 磷酸化組胺受體H1抗體規(guī)格: 0.1ml
PEA15 星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體規(guī)格: 0.2ml
bFGF/FGF2 堿性成纖維細(xì)胞生因子抗體規(guī)格: 0.1ml
RLBP1L1 視黃醛結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
phospho-PAK1/2/3(Thr423) 磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體規(guī)格: 0.1ml
Aurora B/STK-1 有絲分裂激酶B抗體規(guī)格: 0.1ml
MFGE8/BA46 腺上皮細(xì)胞抗原BA46抗體規(guī)格: 0.2ml
MKK3/MEK3 絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-GIT1(Tyr510) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1規(guī)格: 0.1ml
APOC4/Apolipoprotein CIV 載脂蛋白C4抗體規(guī)格: 0.2ml
Nrf2 核因子2相關(guān)因子2抗體規(guī)格: 0.1ml
PCDHGA5 原鈣粘蛋白γA5抗體規(guī)格: 0.2ml
PIG3/TP53I3 p53誘導(dǎo)蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml
NAIF1 protein 核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1規(guī)格: 0.2ml
Amphiregulin 雙調(diào)蛋白(結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生因子)抗體規(guī)格: 0.1ml
SORBS2/ArgBP2 氨酸結(jié)合蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
phospho-CSF1R (Tyr723) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體規(guī)格: 0.1ml
ANKMY1 睪特異性錨樣蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
phospho-c-Abl(Tyr276) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 0.1ml
KLK3/Prostate Specific Antigen 激肽釋放酶3/舒血管素3抗體規(guī)格: 0.2ml5mg CFDA SE ( 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針 )
12 塊 SDS-PAGE 預(yù)制膠
Cyanine 5-NHS Ester 12x50nm 22-0150-12
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝帶芯 ) 1000 支 17-020-1000
5ku 蘋(píng)果酸脫氫酶
10 次 百萬(wàn)堿基血液 DNAout
65KU SOD( 抗氧化酶 )
2500U 末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶 (TdT)
SP600125(JNK 抑制劑 ) 5mg 23-0730-5
細(xì)菌 DNAout 50 次 60707-50
100mL RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.0
250mL 超敏化學(xué)發(fā)光 (HRP) 檢測(cè)試劑盒(ECL)
100mL 超培養(yǎng)基
1mL 衣溶液 ,5mg/mL
H5N1 神經(jīng)氨酸酶抑制劑鑒定試劑盒 100 次 18-0100-100
DNA Tris HCl,1M,pH8.5 100mL 101207-100
0.1mg Staurosporine(PKC 抑制劑 )
50 次 DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-5000 bp)
50 次 柱式病毒 RNAout
1mL Origami B(DE3) 菌種