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詳細(xì)介紹
雜交瘤細(xì)胞；A375sci*質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
雜交瘤細(xì)胞；A375sci*操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
pBS KS(+)
pCB4
pcDNA6.2/C-YFP-DEST(pcDNA6.2CYFPDEST)
pCMV-dR8.2 dvpr（pCMVdR8.2dvpr）
pCMV6-AN-His-HA(pCMV6ANHisHA)
pCW-Cas9（pCWCas9）（60908-2378）
pDONR223
pEF1/V5 His C（pEF1V5HisC）
pET-24b(+)(pET24b)(60908-2788)
pET-GST（pETGST）（60908-2768）
pFA6a-3HA-TRP1(pFA6a3HATRP1)
pFlag-CMV-1(pFlagCMV1)
pGEM-3z/626(pGEM3z626)
pGL4.31[luc2P GAL4UAS Hygro]
pHcRed1
pHT304（60908-4160）
pIRES2-EGFP(pIRES2EGFP)（60908-4260）y
pJW2
pLenti CMV/TO DEST （pLentiCMVTODEST）(775-1)
pLIC-CH
pLVX-Hom-Nuc1(pLVXHomNuc1)FLASH/CASP8AP2 半胱氨酸蛋白酶8相關(guān)蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml
Properdin P因子/備解素抗體規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG規(guī)格: 0.1ml
Phospho-FAK/PTK2(Tyr397) 磷酸化粘著斑激酶抗體規(guī)格: 0.1ml
FAM59B FAM59B蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗牛IgG規(guī)格: 0.1ml
phospho-MEK1/MAP2K1(Thr292) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體規(guī)格: 0.1ml
CCDC46 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白46抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM 兔抗馬IgM規(guī)格: 1mg
phospho-EGFR (Thr678) 磷酸化表皮生因子受體抗體規(guī)格: 0.1ml
beta-Amyloid(25-35) β淀粉樣肽（25-35）抗體規(guī)格: 0.1ml
XRCC1 X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
DPPA2/PESCRG1 多能發(fā)育相關(guān)基因2抗體規(guī)格: 0.1ml
ABHD13 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體規(guī)格: 0.2ml
ULBP2/N2DL2 UL16結(jié)合蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
DCIR/CLEC4A C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體規(guī)格: 0.2ml
katanin p80 劍蛋白p80抗體規(guī)格: 0.2ml
Transferrin 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
Cyclin B1 周期素B1抗體規(guī)格: 0.1ml
RACGAP1 Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體規(guī)格: 0.2ml
TGF beta R2/TGFBR2 轉(zhuǎn)移生因子β受體2抗體（TGF-βRⅡ）規(guī)格: 0.2ml
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