詳細(xì)介紹
雜交瘤細(xì)胞;1F2圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞;1F2圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 半貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
組織蛋白酶K(CTSK)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Cathepsin K (CTSK)
雌激素受體β(ERβ)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Estrogen Receptor Beta (ERb)
腦鈉素(BNP)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Brain Natriuretic Peptide (BNP)
髓過(guò)氧化物酶(MPO)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Myeloperoxidase (MPO)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶β3肽(ATP1β3)單克隆抗體Monoclonal Antibody to ATPase, Na+/K+ Transporting Beta 3 Polypeptide (ATP1b3)
90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Heat Shock Protein 90kDa Beta 1 (HSP90b1)
視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)
整合素α2B(ITGα2B)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Integrin Alpha 2B (ITGa2B)
蛋白酪氨酸磷酸酶受體S(PTPRS)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type S (PTPRS)
山梨醇脫氫酶(SDH)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Sorbitol Dehydrogenase (SDH)
B-細(xì)胞激活因子(BAFF)單克隆抗體Monoclonal Antibody to B-Cell Activating Factor (BAFF)
蛋白激酶Cα(PKCα)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Protein Kinase C Alpha (PKCa)
干擾素誘導(dǎo)T-細(xì)胞α亞族趨化劑(ITαC)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant (ITaC)
鈣蛋白酶2(CAPN2)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Calpain 2, Large Subunit (CAPN2)
去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NET)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Norepinephrine Transporter (NET)
鞘氨醇1磷酸酯受體1(S1PR1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Sphingosine 1 Phosphate Receptor 1 (S1PR1)
尿皮質(zhì)素3(UCN3)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Urocortin 3 (UCN3)
細(xì)胞色素P450家族成員2D6(CYP2D6)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Cytochrome P450 2D6 (CYP2D6)
芳香烴受體核轉(zhuǎn)位因子樣蛋白(ARNTL)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Aryl Hydrocarbon Receptor Nuclear Translocator Like Protein (ARNTL)200 次 柱式血液 DNAout
10mL 制霉菌素溶液 ,2mg/mL
ATP 酶測(cè)試盒 ( 組織及細(xì)胞膜不需高速離心 ) 18-0020-50 50 T
DNA PVP K30 溶液,20% 100865-100 100mL
5000U SP6 RNA 聚合酶
100 次 DNA PAGE 膠回收試劑盒
1.5mL 酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )
1mL JM103 菌種
p19miRNA 檢測(cè)試劑盒 130703-50 50 次
0.5mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD) 120668C-1 1個(gè)
250mg 四氮唑藍(lán) (NBT)
5次 大提柱式 Ti 質(zhì)粒 DNAout
25 次 一站式真菌 mRNAout
10mL 膦酰二肽溶液,10mg/mL
NotI 17-0160 150U
顯影粉 130808-1 1袋
100 次 胎盤堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒
25mg 多聚 -L- 賴氨酸 (3-7 萬(wàn) )
1只 硅膠膜離心吸附柱 ( 大提 ) 收集管
10000U 核糖核酸酶 RNase If
RACE 技術(shù)服務(wù) R004-1 1次
ATP 溶液,2.5mM 131216-2 2mL