詳細(xì)介紹
小鼠雜交瘤細(xì)胞;GFP圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞;GFP圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 半貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該雜交瘤細(xì)胞由湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司制備并提交,細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗,可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
15-keto Prostaglandin F1α (10 mg)9。alpha。,11。alpha。-dihydroxy-15-oxo-prost-13E-en-1-oic acid; 15-keto PGF1α; 15-keto Prostaglandin F1α
5-iPF2α-VI (50 ug)5,9。alpha。,11。alpha。-trihydroxy-(8。beta。)-prosta-6E,14Z-dien-1-oic acid; iPF2α-I; 5-iPF2α-VI
Lumula (5 mg)N-ethyl-9。alpha。,11。alpha。-dihydroxy-15-oxo-20a,20b-dihomoprost-5-en-1-amide; Maxeyprost|Unoprostone N-ethyl amide; Lumula
5-trans Latanoprost (50 mg)9。alpha。,11。alpha。,15R-trihydroxy-17-phenyl-18,19,20-trinor-prost-5E-en-1-oic acid, isopropyl ester; 5,6-trans Latanoprost; 5-trans Latanoprost
17-trans Prostaglandin F3α (100 ug)9α,11α,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E,17E-trien-1-oic acid; 17-trans PGF3α; 17-trans Prostaglandin F3α
Prostaglandin K2 (100 ug)9,11-dioxo-15S-hydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; PGK2; Prostaglandin K2
20-carboxy Leukotriene B4 (50 ug)5S,12R-dihydroxy-6Z,8E,10E,14Z-eicosatetraene-1,20-dioic acid; 20-carboxy LTB4; 20-carboxy Leukotriene B4
15-deoxy-Δ12,14-Prostaglandin J2-d4 (100 ug)11-oxo-prosta-5Z,9,12E,14E-tetraen-1-oic-3,3,4,4-d4 acid; 15-deoxy-Δ12,14-PGJ2-d4; 15-deoxy-Δ12,14-Prostaglandin J2-d4
11(R)-HETE (100 ug)11R-hydroxy-5Z,8Z,12E,14Z-eicosatetraenoic acid; 11(R)-HETE
11(R)-HEDE (250 ug)11R-hydroxy-12E,14Z-eicosadienoic acid; 11(R)-HEDE
Precoated (Goat Anti-Mouse IgG) EIA 96-Well Solid Plate (1 ea)Precoated (Goat Anti-Mouse IgG) EIA 96-Well Solid Plate
Latex Beads-Rabbit IgG-FITC Complex (1 ea)Latex Beads-Rabbit IgG-FITC Complex
6-keto Prostaglandin F1α EIA Standard (1 ea)6-keto Prostaglandin F1α EIA StandardRhod-2,三鹽1mg
DEPC 水100mL
大提柱式細(xì)菌 DNAout4次
尿嘧啶 -DNA 糖基化酶500U
CAS115-39-9溴酚藍(lán)5g
12-194Y2HGold 酵母菌種1mL
一站式 His 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
克必隆 eTS 超敏 PCR 法 cDNA 合成試劑盒10 次
直鏈淀粉250mg
PRMI1640 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
DNA CTAB( 十六烷基*基溴化銨 )100g
140625-20雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-APC·7-AAD) 20 次
90602H-50DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ50 次
十二烷基硫酸100g
動(dòng)物 DNAout100mL
6- 芐基氨基嘌呤1g
鏈霉親和素,AP 標(biāo)記0.5mL
CAS27848-80-2L-(+) 乳酸鋰鹽5g
130541-10E-64 蛋白酶抑制劑,20mg/mL10mL
柱式昆蟲 DNAout50 次
Monensin ( 蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑 )100mg
ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒200 次
動(dòng)物 DNAout250mL
DNA 稀釋液10mL
120403-300蝦堿性磷酸酶300U
100409-56nt 隨機(jī)引物,0.5μg/μL5μg
Western 印跡膜封膜液 ( 尼龍膜 )100mL