詳細(xì)介紹
小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞來(lái)自骨髓瘤細(xì)胞系 NS-1;由于次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HPRT、HGPRT)和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(APRT)缺陷導(dǎo)致該細(xì)胞對(duì)腺苷和鳥(niǎo)嘌呤的類似物抵抗。在氨基蝶呤、腺嘌呤和胸腺嘧啶存在的條件下,當(dāng)該細(xì)胞作為永生化細(xì)胞與Rb(8.12)易位的雌性小鼠的B細(xì)胞融合時(shí),會(huì)產(chǎn)生Ig重鏈基因位點(diǎn)的陽(yáng)性選擇;Ig重鏈基因的選擇可使雜交瘤細(xì)胞更穩(wěn)定地合成抗體。該細(xì)胞鼠痘病毒陰性。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 維持細(xì)胞濃度在2×105~1×106 cells/ml之間;2~3天換液1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體 50~60
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
胰凝乳蛋白酶,測(cè)序25μg
CAS12650-88-3溶菌酶1g
130542-0.1水蛭素溶液,2mg/mL0.1mL
柱式毛發(fā) DNAout50 次
mRNA 提取試劑盒25 次
ATP 酶測(cè)試盒 ( 組織及細(xì)胞膜不需高速離心 )50 T
植物 DNAout50 次
Rosetta-gami(DE3)plysS 菌種1mL
130659-10000三磷酸苷雙磷酸酶10,000 milli U
80206-50兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次
Western 印跡膜抗體清除劑50mL
過(guò)氧化氫酶 ( 牛肝 )1g
D- 果糖250g
Zetterqvist 固定液250 mL
CAS9005-67-8吐溫 -60500mL
19-0080-500 F12K 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )500mL
130979-50柱式血清血漿 DNAout50 次
瓊脂糖100g
D/F12 培養(yǎng)基100mL
大提柱式細(xì)菌 RNAout5次
Bst DNA 聚合酶,全長(zhǎng)500U
CAS134-58-78- 氮雜鳥(niǎo)嘌呤1Vial小鼠腺毒(ADV)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠4羥基壬烯酸(4-HNE)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
兔子促黃體激素(LH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人組胺(HIS)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人血管內(nèi)皮抑素抗體(ES-Ab)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人唾液酸(SA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人水通道蛋白1(AQP-1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝