詳細(xì)介紹
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;RD圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;RD圖片
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞由武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院吳建國(guó)教授提交保藏。RD細(xì)胞可用于人橫紋肌肉瘤的基礎(chǔ)研究和臨床研究。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C32
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
101207-100DNA Tris HCl,1M,pH8.5100mL
Staurosporine(PKC 抑制劑 )0.1mg
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-5000 bp)50 次
柱式病毒 RNAout50 次
Origami B(DE3) 菌種1mL
130909-100Red-Taq DNA 聚合酶100U
120668K-115mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個(gè)
蘇木色精10g
大提柱式血液 DNAout4次
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒 ( 含轉(zhuǎn)化液 )20 次
Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
17-0250XhoI2000U
121206-10DNA 稀釋液10mL
糖蛋白蛋白純化試劑盒50 次
E.coli DNA 聚合酶 Ι500U
即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL
3′-O-Me-m7G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD
12宿主細(xì)胞1mL
130551-80天凈沙單細(xì)胞 RNA 擴(kuò)增試劑盒80 次
無內(nèi)毒素水50mL
GSH—PX 測(cè)試盒50 T
硫酸慶大500mg
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次人c-myc基因產(chǎn)物(c-myc)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
犬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
牛丙酮檢測(cè)(acetone)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
雞溶菌酶(LZM)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
黃曲霉素M1(AFM1)ELISA試劑盒48T/96T試劑盒組裝/原裝
鵝P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠胰高血糖素(Glu)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠甲狀旁腺激素(PTH) ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
豬生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
豬補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
魚促性腺激素釋放激素(GnRH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝