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人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LS 174T圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng) 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LS 174T圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞是LS 180結(jié)腸腺癌細(xì)胞株的胰蛋白酶化變種。它比親本更易傳代，像LS 180一樣生成大量的癌胚抗原(CEA)。電鏡研究表明，它有豐富的微絲和胞漿黏液素液泡；血清學(xué)檢測(cè)直腸抗原3陽(yáng)性；p53抗原表達(dá)陰性，但mRNA表達(dá)陽(yáng)性；角蛋白陽(yáng)性；癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表達(dá)呈陽(yáng)性；癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測(cè)；可產(chǎn)生IL-10、IL-6和黏蛋白。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C104
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

丙酮酸激酶2mg
雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V- 熒光素 647·7-AAD）50 次
CAS504-17-6β- 硫代巴比妥酸5g
100810-1000超快蛋白銀染試劑盒1000mL
α-Actin 小鼠單抗30μL
氯溶液 ,25mg/mL10mL
D- 半乳糖醛酸1g
羥脯氨酸測(cè)試盒( 堿水解法 )( 測(cè)動(dòng)物血清、組織、尿液 )48 T
一站式 His 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
131010-50胰蛋白酶干粉50g
101120-50柱式細(xì)菌 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)5mL
9,10- 二甲基 -1,2 苯并蒽100g
Dansyl chloride 100mg
亞硫酸氫鹽 DNA 修飾試劑盒50 次
22-0210-25DiBAC4(3)25mg
120664-11μL 超微量分光光度計(jì)1個(gè)小鼠溶菌酶(LZM)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠白介素2受體(IL-2R)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
豚鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
兔血纖蛋白原(Fbg)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
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人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人血栓素A2(TX-A2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
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人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人胎球蛋白A（FETU-A）ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝