詳細(xì)介紹
人胰腺癌細(xì)胞;AsPC-1圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人胰腺癌細(xì)胞;AsPC-1圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 一個(gè)胰腺癌病人的腹水中的細(xì)胞移植到裸鼠后建立了這個(gè)細(xì)胞株。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,13;D13S317:9,12;D16S539:11;D18S51:18;D19S433:14;D21S11:28,30;D2S1338:22,23;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:12,13;D8S1179:13,15;FGA:24;TH01:7,9.3;TPOX:8,10;vWA:17
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
四氮唑藍(lán) (NBT)250mg
CAS69-93-2尿酸25g
131094-25生物素化的牛血清白蛋白25mg
熒光尺1個(gè)
8- 氧代鳥嘌呤 DNA 糖基化酶80U
BL21(DE3)菌種1mL
140387-10EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
磷酸氫二250g
鯡魚精 DNA 溶液1mL
DNA 尿素 -PAGE 上樣液1.5mL
接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)5nmol
90402-50蛋白膠微量回收試劑盒50 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.5100mL
動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒50 次
CAS9004-67-5甲基纖維素25g
DNA CTAB( 十六烷基*基溴化銨 )100g
CAS73-22-3L- 色氨酸5g
130985-100免 DNA 提取 PCR 試劑盒100 次
精胺1g2×YT瓊脂/2×YT Medium AgarBR250克國產(chǎn)/進(jìn)口
抗生素Ⅳ號(hào)培養(yǎng)基/抗生素4號(hào)培養(yǎng)基/Antibiotic Agar NO.4兩性霉素B等藥品的效價(jià)測(cè)定250克國產(chǎn)/進(jìn)口
NCI-H596(人肺腺鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
MGC80-3(人胃細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
EL4(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肥大細(xì)胞細(xì)胞英文名稱:P815
ER培養(yǎng)基/Eriksson MediumBR10升國產(chǎn)/進(jìn)口
人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
L-Glutamine (100X)規(guī)格:100ml
中性紅染色液規(guī)格:100ml
A9(小鼠下結(jié)締組織細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人食管細(xì)胞英文名稱:KYSE410
人鼻咽母系細(xì)胞英文名稱:CNE-2Z
SK-MEL-1(人膚黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HK-2, 人腎質(zhì)近曲小管上細(xì)胞
1640培養(yǎng)基/1640 Medium/RPMI 1640含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉10升國產(chǎn)/進(jìn)口
抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基(PH7.8-8.0)/抗生素2號(hào)培養(yǎng)基(PH7.8-8.0)/Antibiotic Agar NO.2克林霉素、林可霉素等藥品的效價(jià)測(cè)定250克國產(chǎn)/進(jìn)口
NCI-H838(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Acridine Orange(AO)100mg
131040-50人重組 AP1(c-Jun)50fpu